人sbaff-dt388融合蛋白在大杆菌表达及其活性的研究

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1、原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：雍叠盘日期：童殳!!：工。12关于学位论文使用授权的声明本人完全了解济南大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借鉴；本人授权济南大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库

2、进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。口公开口保密(——年，解密后应遵守此规定)论文作者签名：生塑亟导师签名目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯II英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯V主要符号表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯Ⅷ第一部分人sBAFF-DT388基因克隆及序列分析前。言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11刖舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯材料与方

3、法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯2结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18第二部分人sBAFF-DT388基因在大肠杆菌中的表达及重组蛋白的鉴定前言⋯⋯⋯⋯g00⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19日U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19结果⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·35讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39第三部分人sBAFF-DT388重组蛋白的生物学活性测定前一言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“．．”4‘0一日U吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯““”材料与方法⋯·00ool⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯45讨论⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47结论⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··49参考文献O0001⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯g0000⋯⋯⋯⋯50文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯54攻读硕士学位期间的研究成果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6l致谢⋯⋯⋯⋯00aBO0—000⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·62人sBAFFDT3RR融台蛋!!疗上肠F菌表选砭!(活f"F咿究人s队FF-DT388融合蛋白在大肠杆菌表达及其活

6、性研究专业免疫学研究生朱月婷导师赵跃然教授摘要免疫毒素(Immunotoxins，IT)，又被称之为生物导弹，其具有专门选择性的破坏某一特异性标记细胞功能的一类融合蛋白，它是通过通过化学交联的方式将具有高度特异性的单克隆抗体与具有强大杀伤作用的毒素分子构建而成。免疫毒素利用肿瘤细胞上导向分子的受体与细胞结合，进入细胞后由毒素发挥蛋白质合成抑制作用，最终能够导致靶细胞的死亡，其具备了特异性的识别的功能和毒素杀伤的功能效应，对传统的治疗肿瘤化疗、放疗的缺陷进行了弥补。B淋巴细胞刺激因子(Blymphocytestimulatingfactor

7、，BAFF)属肿瘤坏死因子家族新成员，因其在B细胞发育及自身免疫病中起重要作用而倍受关注。BAFF通过与其受体结合广泛参与T、B淋巴细胞增殖和功能调节，发挥其生物学效应。BAFF的缺乏可导致免疫功能低下，过表达则与多种自身免疫性疾病的发生和发展密切相关。目的为探讨人sBAFF-DT388在B细胞恶性肿瘤及自身免疫性疾病中的治疗作用，我们进行了人sBAFF—DT388融合蛋白表达载体的构建、重组蛋白的分离纯化及其生物学活性的初步研究。方法1．根据优化合成的hsBAFF-DT388基因序列设计引物，经PCR扩增将目的基因片段插入虱JpMDl9

8、-T克隆载体，菌落PCR、限制性内切酶酶切及DNA测序鉴定阳性克隆。2．重组克隆载体经NdeI、XhoI双酶切后，琼脂糖凝胶电泳分离目的基因，将其插Il济南J、学硕L学位沦文入表达载体pCol