选修三专题二《细胞工程》第二节《动物细胞工程》.doc

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1、选修三专题二《细胞工程》第二节《动物细胞工程》动物细胞工程常用的技术手段有：动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、制备单克隆抗体等。其中，动物细胞培养技术是其他技术的基础。一、动物细胞培养：1、概念：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。2、动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）处理，使其分散成单个细胞→制成细胞悬液→转入培养瓶中进行原代培养→贴满瓶壁的细胞

2、重新用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）处理分散成单个细胞继续传代培养。3、细胞悬液中的细胞贴附在瓶壁生长的现象，称为细胞贴壁。当贴壁细胞分裂生长到相互接触时，细胞会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。4、目前用于保存的细胞通常是用传代培养到10代以内的细胞，因为此时的细胞能保持正常的二倍体核型。在传代培养到10-50代时，细胞代谢缓慢，多数细胞会死亡。若50代后仍有细胞能存活，则这部分细胞一定发生了遗传物质的改变（即：突变），获得了不死性，朝着等同于癌细胞的方向发展。5、动物细胞培养的条件：①无菌

3、、无毒的环境：如何做到无菌？第一，培养液和培养用具应进行无菌处理；第二，通常还要在培养液中添加一定量的抗生素。如何做到无毒？应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。②营养：合成培养基成分中有：葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血清、血浆等天然成分。③温度和PH：适宜温度：哺乳动物一般与体温相近；pH：7.2～7.4。④气体环境：95%空气＋5%CO2。O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。6、动物细胞培养技术的应用：制备生物制品、检测有

4、毒物质、培养基因工程的受体细胞、培养医学研究的各种细胞。二、动物细胞核移植：1.动物细胞核移植的概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其形成重组细胞并最终发育为个体。用核移植技术得到的动物称为克隆动物（属于无性繁殖）。2.选用去核卵(母)细胞的原因：卵(母)细胞比较大，容易操作；细胞质多，营养丰富。63.种类：哺乳动物核移植可以分为胚胎细胞核移植（比较容易）和体细胞核移植（比较难）。胚胎移植核移植4.体细胞核移植的大致过程是：（右图）5.体细胞核移植技术的应用：①

5、加速家畜遗传改良进程，促进良畜群繁育；②保护濒危物种，增大存活数量；③转基因克隆动物可作为乳腺生物反应器生产医用蛋白；④转基因克隆动物作为异种移植的供体；⑤核移植的胚胎干细胞经诱导分化用于组织器官的移植等。6.体细胞核移植技术存在的问题：成功率低、克隆动物存在着健康问题、表现出遗传和生理缺陷等。三、动物细胞融合：动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较：比较项目融合的原理诱导融合的方法意义应用植物体细胞杂交细胞膜的流动性物理法：离心、电刺激、振动化学法：聚乙二醇克服了远缘杂交的不亲和性培育杂种植株动物

6、细胞融合细胞膜的流动性物理法：离心、电刺激、振动化学法：聚乙二醇，生物法：灭活的病毒克服了远缘杂交的不亲和性制备单克隆抗体四、制备单克隆抗体：抗原注入小鼠体内1.抗体：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。分离2.单克隆抗体的制备过程：（1）杂交瘤细胞的特点：骨髓瘤细胞已免疫的B淋巴细胞既能大量繁殖，又能产生专一性的抗体。细胞融合（2）融合后的细胞有几种类型？3种。选出杂交瘤细胞3.单克隆抗体的优点：克隆化培养与抗体阳性检测特异性强，灵敏度高，并能大量

7、制备。4.单克隆抗体的作用：选出符合要求的杂交瘤细胞①作为诊断试剂：注入小鼠培养基②用于治疗疾病和运载药物：体外培养体内培养主要用于治疗癌症治疗，可制成“生物导弹”，即：从培养液提取单克隆抗体从腹水提取单克隆抗体与抗癌药物的结合体。6巩固练习1、如图是动物细胞培养的基本过程示意图。请根据图回答：(1)容器B中用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理，是为了__________________________。(2)培养首先在C瓶中进行，这时的细胞培养称为____________，悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶

8、壁上，称为________________。细胞进行有丝分裂，数量不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的____________。为了把C瓶中的细胞分瓶，要用________处理，目的是使细胞从瓶壁上脱离下来，然后配成________，再分装。(3)分装后，在D瓶中培养叫做________。一般来说，细胞在传至________代左右时，增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，这时部分细胞的细胞核型可能会发生变化。少部分细胞会克服细胞寿命的自然极限，获得不死