动物细胞工程第二节

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1、2.2动物细胞工程——动物细胞融合与单克隆抗体动物细胞工程常用的技术手段有：动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合生产单克隆抗体动物细胞融合“太空婚礼”2003年1月5日，神舟四号准确着陆。这次历时6天零18个小时的太空飞行开展了多项在轨研究，其中有一项被媒体描述成“太空婚礼”的生物实验。不过婚礼中的“新郎”和“新娘”是一些体细胞：植物细胞“新人”是有液泡的黄花烟草原生质体和脱液泡的革新一号烟草原生质体，动物细胞“新人”是小白鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞。作为“新房”的是一个黑色的小盒子——电融合仪

2、。原来这是科技工作者在空间微重力的条件下进行的细胞融合实验。动物细胞融合动物细胞融合也称细胞杂交,是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。细胞细胞（一）概念（二）原理和结果原理：细胞膜的流动性结果：形成杂交细胞:具有原来两个或多个细胞的遗传物质植物体细胞杂交：细胞—完整的植物体（三）促进动物细胞融合的方法：电激、振动、离心等物理方法聚乙二醇（PEG）等化学方法灭活的病毒促进植物细胞融合的方法：电激、振动、离心等物理方法聚乙二醇（PEG）等化学方法杂种植株融合的原生质体AB再生出细胞壁脱分化

3、愈伤组织再分化植物细胞的融合植物组织培养植物细胞A原生质体B原生质体A杂种细胞AB去壁去壁人工诱导纤维素酶和果胶酶物理方法化学方法融合完成的标志植物细胞B植物体细胞杂交不同DNA的两个细胞灭活病毒诱导细胞融合融合后的细胞进行有丝分裂（四）动物细胞融合过程动物细胞无细胞壁不需要酶处理，促进融合的方法除了物理化学方法外还可以用灭活的病毒。动物细胞融合只包含融合这一个阶段，形成杂交细胞，而植物体细胞杂交技术则需要两个阶段完成，将植物体细胞融合得到杂交细胞后，再利用植物组织培养技术把杂交细胞进一步培养成

4、完整植株。二者的比较：（五）动物细胞融合的应用1.突破有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能。2.成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。3.为制造单克隆抗体开辟了新途径。鼠—鸡、鼠—兔、鼠—猴、人—鼠、人—兔、人—鸡、人—蛙、酵母菌—鸡、人—胡萝卜等主要用于制备单克隆抗体培育作物新品种物理、化学方法（同左）灭活的病毒物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞膜的流动性细胞膜的流动性、植物细胞全能性用途诱导方法细胞融合

5、的过程原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较单克隆抗体抗体是由何种细胞产生的？2.抗体是如何产生的？？单克隆抗体产量少、纯度低、特异性差单克隆抗体4、传统制备抗体的缺点是？3、传统制备抗体的方法是？向动物体内反复注入某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体。一个美丽的发现：科学家们发现，哺乳动物感染病原体后，体内会形成相应的B淋巴细胞。B淋巴细胞能分泌抗体，凝聚或杀死这些病原体。动物在免疫反应的过程中，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上，但是

6、每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。因此，要想获得大量的单一抗体，必须克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群。一个难题：在体外培养的条件下，一个B淋巴细胞不可能无限增殖。一个大胆的猜想：1975年英国科学家米尔斯坦和科勒在前人工作的基础上，设计了一个极富创造性的实验方案：他们想到，如果把一种B淋巴细胞与能在体外大量增殖的骨髓瘤细胞进行融合，所得到的融合细胞就能大量增殖，产生足够数量的特定抗体。B淋巴细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞动物细胞融合既能无限增殖又能产生特异性抗体单克隆抗体的概念：单一的B淋巴细胞经

7、过与骨髓瘤细胞融合，大量增殖而产生的特异性强，灵敏度高的抗体。向小鼠体内注射特定的抗原从小鼠脾脏中获得B淋巴细胞培养骨髓瘤细胞获得骨髓瘤细胞动物细胞融合第一次筛选：选择性培养基BB细胞瘤瘤细胞B瘤细胞杂交瘤细胞能产生特异性抗体的杂交瘤细胞第二次次筛选：专一抗体检验阳性克隆化培养大量的杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔内增殖单克隆抗体单克隆抗体的制备过程单克隆抗体的制备想一想？1.为什么选择一种B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行融合？单一的B淋巴细胞产生单一的抗体骨髓瘤细胞无限增殖二者融合后的杂交瘤细胞既能产生单

8、一的抗体又能无限增殖。2.怎样获取这两种细胞？B淋巴细胞：先向小鼠体内注射特定的抗原，后从小鼠的脾脏中提取骨髓瘤细胞：通过动物细胞培养即可大量获得3.单克隆抗体制备过程中要经过几次筛选？每次筛选的目的是什么？怎样进行筛选？至少经过两次筛选。第一次筛选是为了筛选出杂交瘤细胞，用选择性培养基进行筛选；第二次筛选是为了筛选出能产生特异抗体的杂交瘤细胞。方法是用专一抗体检验阳性4、最终获得单克隆抗体的方法有哪些？体外培养法：将杂交瘤细胞在体外做大规模的培养，在细胞培养液中提取。体内培养法：将杂交瘤细胞注