专题2细胞工程-动物细胞工程

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1、其研究工程取得重大进展的有如下几个方面：动物细胞工程技术与植物细胞工程技术的原理基本相同常用的技术手段动物细胞培养核移植单克隆抗体动物细胞融合1．细胞及组织培养技术2．换核技术3．克隆技术2.1-动物细胞工程一、动物细胞培养动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液胰蛋白酶处理分散成单个细胞10代细胞原代培养50代细胞无限传代遗传物质改变遗传物质未改变传代培养为什么要分散成单个细胞1为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？这些组织或器官上的细胞生命力旺盛，分裂能力强且代数低。2为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？成块组

2、织有接触抑制现象，分散了做成细胞悬浮液利于培养3动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体（现在条件下无全能性）。细胞悬浮液原代培养细胞株细胞系单个细胞传代培养10代细胞40-50代细胞无限世代0代细胞细胞名称培养代数培养形式过程：从动物机体中取出组织剪碎加胰蛋白酶细胞游离加培养液将细胞接种到培养瓶内培养（1—2天换一次培养液）细胞贴壁生长长成单层细胞原代培养(primaryculture)原代培养原代培养：从机体内取出的第1代细胞培养到第10代以内的

3、细胞的培养。传代培养：将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶的培养。或将原代培养细胞分成若干份，接种到若干培养基上，使其继续生长，繁殖。细胞株从原代培养细胞群中筛选出的，具有特定性质或标志的细胞群，能传到40-50代。遗传物质没有发生变化。培养到40-50代后的部分发生突变或转化的细胞，能无限制的繁殖下去。遗传物质发生了变化，带有癌变的特点。或指可连续传代的细胞。细胞株：细胞系：细胞悬浮液10代细胞50代细胞无限传代原代培养传代培养细胞株细胞系如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖(遗传物质改变)

4、(人教版)培养的细胞为什么会贴壁生长？大多数组织细胞不适应悬浮生长，他们必须在固体的表面上生长和分裂。贴壁生长后随细胞数目的增多，会出现接触性抑制的现象。要定期要胰蛋白酶处理使细胞从瓶壁脱离，配成悬浮液，分装多瓶再培养动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。用胰蛋白酶处理动物胚胎或幼龄动物的组织、器官？分解弹性纤维细胞贴壁细胞贴壁：细胞培养时，悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相

5、互接触时，细胞就会停止分裂增殖的现象。动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官（接触抑制现象）。为什么动物组织细胞要用胰蛋白酶处理？为什么要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离下来？大多数组织细胞不适应悬浮生长，它们必须在固定的表面上生长和分裂。细胞在培养瓶中贴壁生长，随着细胞越来越多，当贴壁生长的细胞分裂生长到表面相互接触时就停止分裂增长，这种现象叫做接触抑制。需要定期用胰蛋白质酶使细胞从壁上脱下来，传代培养。胰蛋白酶会消化细胞吗？胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白质外，长时间作用也会消化

6、细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用；作用时间太短，细胞不容易脱落，因此必须控制好作用时间。实际应用中的处理：做预实验，摸清效果最好时的胰蛋白酶的用量和作用时间。动物细胞培养条件：1、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）3、温度和PH36.5+（-）0.5度,7.2-7.44、气体环境：O2和CO2（95%空气和5%CO2）保证细胞顺利的生长增殖植物细胞和动物细胞培养的比较比较项目植物组织培养动物细胞培养理论基础培养基性质培养基特有成分培养结果培养目的获得细胞或细胞分泌蛋白

7、细胞的全能性细胞株、细胞系植物体快速繁殖、培育无病毒植株等葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素液体培养基固体培养基细胞增殖1、为何细胞在培养瓶中贴壁生长？2、为何要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离下来，为何要搅拌？3、比较动物和植物组织培养所用的培养基的成分.细胞有接触抑制的现象分散成单个细胞便于从培养液中获得营养，排出代谢废物，利于继续培养都有糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等动物细胞培养液中还需加入动物血清、血浆等天然成分。为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清？血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素等多种营养；还含有多种未知的

8、促细胞生长因子、促贴附因子及其他活性物质，能促进细胞的生长、增殖和贴附。因此，细胞培养时，一般需添加10%～20%的血清。细胞培养的方式：1、群体培养：将含有一定数量细胞的悬液置