专题二动物细胞工程

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1、动物细胞工程动物细胞工程常用的技术手段：动物细胞培养、动物细胞核移植、动物细胞融合、单克隆抗体动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。提问：植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物组织培养,植物体细胞杂交烧伤病人图片异体皮肤移植图片思考与探究：如何用细胞培养技术，为烧伤病人植皮？取该患者的皮肤进行细胞培养,获得足量的细胞后再移植一、动物细胞培养动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。(一)、选材：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们细胞增殖能力强，分裂

2、旺盛，分化程度低，容易培养。在进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。（二）.分散成单个细胞1、为什么细胞培养要分散成单个细胞培养？细胞所需的营养容易供应，代谢废物容易排除；2、动物细胞生长特性：细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现

3、象称为细胞的接触抑制。（三）动物细胞培养过程：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液胰蛋白酶10代细胞原代培养50代细胞传代培养细胞株无限传代细胞系单个细胞加培养液遗传物质未改变遗传物质已改变动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。（分解弹性纤维）动物细胞的培养过程幼龄动物取动物器官和组织剪碎组织胰蛋白酶处理细胞培养单个细胞1有关概念:原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。传代培养：将原代细胞从培养瓶中取

4、出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。细胞悬浮液10代细胞50代细胞无限传代原代培养传代培养细胞株细胞系如何界定原代培养和传代培养？多数组织细胞固定

5、在表面生长和分裂。随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖遗传物质改变体外细胞生长增殖过程原代培养期（10代细胞以内）传代培养期（10代细胞以后）细胞株：（10~50代细胞）细胞系：（50代细胞以后，细胞发生了癌变）2、动物细胞培养条件：(1)无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）(2)营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）化学分类微生物分类物理分类a.培养基的类型天然培养基合成培养基固体培养基液体培养基选择培养基鉴别培养基b、为什么对动物细胞进行培养时通常要添加血清？血清中含有蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激

6、素等，其中蛋白质主要为白蛋白和球蛋白。其中有些氨基酸动物本身不能合成，必须由培养液提供。血清激素有胰岛素、生长激素等及多种生长因子（如表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、类胰岛素生长因子等）血清还含有多种未知的促细胞生长因子、促帖附因子及其他活性物质，能促进细胞的生长、增殖和贴附。因此，细胞培养时，要保证细胞能够顺利生长和增殖，一般需添加10%~20%的血清。动物细胞培养条件：(1)无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）(2)营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）(3)温度和PH36.5+（-）0.

7、5度,7.2-7.4(4)气体环境：O2和CO2（95%空气和5%CO2）c、动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：1、液体培养基（动物体细胞大都生活在液体的环境）2、成分中有动物血清等d、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体e、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必

8、须控制好胰蛋白酶的消化时间。细胞的全能性细胞株、细胞系植物体培养结果获得细胞或细胞产物快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目3、植物细胞和动物细胞培养的比较（四）