tigar通过增加nadph在脑缺血再灌注损伤中发挥神经保护作用

《tigar通过增加nadph在脑缺血再灌注损伤中发挥神经保护作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、博士学位论文论文题目TIGAR通过增加NADPH在脑缺血再灌注损伤中发挥神经保护作用研究生姓名李梅指导教师姓名秦正红专业名称药理学研究方向神经药理论文提交日期2013年3月TIGAR通过增加NADPH在脑缺血再灌注损伤中发挥神经保护作用中文摘要TIGAR通过增加NADPH在脑缺血再灌注损伤中发挥神经保护作用中文摘要目的：观察脑缺血对TIAGR表达的影响；TIGAR对缺血性神经损伤的影响和TIGAR发挥神经保护作用的初步机制。方法：采用小鼠短暂性大脑中动脉阻塞再灌注(transientmiddlecerebralarteryocclusio

2、n/reperfusion,MCAO/R)模型和体外培养原代神经元缺糖缺氧/复糖复氧（oxygenglucosedripivation/reoxygenation，OGD/R）模型。在动物模型上，免疫荧光法和Westernblot检测TIGAR表达的细胞类型。Westernblot和实时荧光定量(RT-PCR)法检测小鼠大脑缺血皮层TIGAR的mRNA，p53和NOX4蛋白表达的变化。Westernblot检测p53的抑制剂(Pifithrin-α，PFT-α)对小鼠缺血皮层区TIGAR表达的影响。DHE探针标记检测大脑缺血皮层内ROS变

3、化。由慢病毒构建的过表达TIGAR和沉默TIGAR通过侧脑室注射小鼠脑内，免疫荧光法和Westernblot检测TIGAR感染率和蛋白表达；以脑梗死体积、脑水肿和行为学症状等指标评价TIGAR对缺血性脑损伤的影响。在培养原代神经元中给予慢病毒构建的过表达TIGAR和沉默TIGAR处理后，免疫荧光和Westernblot检测TIGAR感染率和蛋白表达；CCK-8、LDH、TUNEL检测TIGAR对OGD/R诱导神经元死亡的保护作用。DCFH2-DA和JC-1探针标记流式细胞术检测NADPH对OGD/R诱导细胞内ROS水平和线粒体膜电位的影响

4、；Westernblot检测OGD/R引起的细胞凋亡蛋白caspase-3蛋白表达变化；CCK-8、LDH、TUNEL检测NADPH对OGD/R诱导细胞死亡的保护作用，通过脑梗死体积、神经症状评分、脑含水量测定检测NADPH、NOX的抑制剂apocynin、VAS2870对脑损伤程度的影响。结果：与胶质细胞相比，TIGAR高表达在神经元细胞中(P<0.01)。Westernblot和RT-PCR结果显示：缺血再灌后TIGAR，p53，NOX4表达增加；PFT-α没有抑制缺血再灌注引起的TIGAR表达的增加。在脑缺血再灌注后ROS在0.5h

5、和12h出现两个峰值(P<0.01)。慢病毒构建的TIGAR能够有效地地侵染脑组织，可提高或沉默I中文摘要TIGAR通过增加NADPH在脑缺血再灌注损伤中发挥神经保护作用TIGAR的表达(P<0.05,P<0.01)；过表达TIGAR能显著减少tMCAO小鼠脑梗死体积，降低脑含水量，改善行为学症状(P<0.05,P<0.01)。在原代培养神经元中慢病毒构建的过表达或干扰TIGAR有效地增加或降低TIGAR的表达。CCK-8、LDH、TUNEL结果显示：过表达TIAGR能显著地减少OGD/R诱导的神经元死亡(P<0.05,P<0.01)；干

6、扰TIGAR加重OGD/R诱导的神经元损伤。NADPH显著地抑制沉默TIGAR诱导的神经元死亡。流式细胞术分析结果显示：过表达TIGAR显著地减少OGD/R诱导的细胞内ROS水平的增强和抑制线粒体膜电位的降低；干扰TIGAR则增加细胞内ROS水平和降低线粒体膜电位，而NADPH阻断了干扰TIGAR的作用。Westernblot显示：过表达TIGAR降低OGD/R诱导的caspase-3的活化；干扰TIGAR增强OGD/R诱导的caspase-3的活化。联合应用NADPH和NOX的抑制剂比单应用NADPH对减小脑梗死体积，减轻脑水肿，改善小

7、鼠的神经行为学障碍更为显著。结论：TIGAR对小鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用，其作用机制可能与增强内源性抗氧化剂NADPH抑制ROS，抑制神经细胞凋亡。外源NADPH对小鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用。关键词：脑缺血再灌注；TIGAR；氧化应激；神经保护；NADPH作者：李梅指导教师：秦正红教授IITheprotectiveeffectofTIAGRonischemia/reperfusioninducedbraininjurythroughincreasedNADPHAbstractTheprotectiveeffectofTIAGR

8、onischemia/reperfusioninducedbraininjurythroughincreasedNADPHAbstractAim:Toobservetheeffectsofce