花青素对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

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1、硕士学位论文花青素对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用Neuro-protectiveEffectsofAnthocyaninsonCerebralIschemiaReperfusionInjury学号：21Q!璺Q!墨大连理工大学DalianUniversityofTechnology大连理工大学学位论文独创性声明作者郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除文中已经注明引用内容和致谢的地方外，本论文不包含其他个人或集体已经发表的研究成果，也不包含其他已申请学位或其他用途使用过的成果。与我一同工作的同志对本研究所做的贡献均已在论文中做了明确

2、的说明并表示了谢意。若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。学位论文题目：壑盔盘主查!塾堡迪垒盘逢迎垒丝盈丝盆塑I国作者签名：璺叁垄拿日期：坦!刍年—鱼月上日大连理工大学硕士学位论文摘要脑缺血所引起的神经元死亡是脑缺血疾病致死致残的主要原因。而对组织造成损伤的主要因素，并不是缺血本身，而是恢复血液供应后，过多的自由基、炎性因子等攻击这部分重新获得血液供应组织内的细胞造成的。脑缺血再灌注损伤后，如何减少神经细胞的死亡促进神经功能的恢复成为了研究的热点。花青素是一种类黄酮化合物，来源广泛，安全低毒，具有抗氧化损伤、抗炎等作用。本研究旨在研究花青素对脑缺血再灌注损伤的小鼠和神经细胞的保护

3、作用并探讨其可能的作用机制。主要研究内容及结论如下：(1)本研究选用昆明小鼠为对象，建立小鼠全脑缺血再灌注模型，研究花青素对其保护作用。应用Morris水迷宫，考察花青素预处理(灌胃，200mg／kg)10天对损伤后小鼠认知能力的影响，发现经过缺血1h再灌注24h后，小鼠的认知能力显著下降，经过花青素预处理能够显著改善小鼠的认知能力。随后，我们采用TTC染色观察小鼠脑组织梗死灶面积的变化情况。结果显示，模型手术后的小鼠脑组织两侧均出现梗死灶，经过花青素预处理后，梗死灶的面积有所减小。之后我们采用苏木精伊红(HE)染色发现缺血1h再灌注24h后的小鼠神经元细胞稀疏，细胞核固缩，经过花

4、青素预处理的小鼠神经元相比未处理组更加饱满、紧密，细胞形态完整。在此基础上，我们通过生化方法检Nd,鼠皮层和海马神经元的MDA、SOD含量，研究自由基和氧化应激损伤对脑缺血再灌注损伤小鼠的作用。结果显示，花青素可以减轻缺血1h再灌注24h的小鼠大脑皮层和海马神经元中的MDA含量升高，SOD活力下降的现象。说明花青素可以通过清除自由基、抗氧化应激损伤来减轻脑缺血再灌注损伤。(2)建立氧糖剥夺／复氧(OGD瓜)细胞模型，检测花青素对神经细胞的保护作用。用MTT法检测BV2细胞经过OGD／R后细胞活力变化情况，采用细胞形态学方法考察花青素对BV2活化程度的影响。结果显示，BV2细胞经过O

5、GD3h，复氧lh后出现细胞活化现象，细胞活力上升，复氧12h后，细胞活力有下降趋势。细胞形态学观察显示，OGD3h，复氧24h后，BV2细胞有活化现象，胞体变大，呈阿米巴状、分支状。花青素预处理后可抑制BV2细胞的活化。我们应用生化方法检测了BV2细胞中NF．v,zB的转录活性和TNF．Q的释放水平，结果显示经过OGD／R诱导的BV2细胞中p65表达量上升，同时BV2细胞上清液中TNF—Q的含量也有显著性的提高，花青素可以降低损伤细胞中p65的表达量和TNF—Q的释放。(3)为了探讨花青素对神经系统细胞的保护作用，活化的小胶质细胞对神经元的作用，我们应用BV2细胞建立OGD／R细

6、胞模型，制备不同OGD／R条件下的细胞培养花青素对缺血再灌注损伤的神经保护作用上清液，用以处理经过H202诱导的受到氧化应激损伤的PCI2细胞，模拟神经系统中细胞混合培养的病理状态。并采用MTT法检测每组PCI2细胞的细胞活力，结果显示，花青素可以减轻PCI2细胞经过H202诱导的氧化应激损伤。OGDlh后的BV2上清液可以提高氧化应激损伤后PCI2的细胞活力，表现出一定的保护作用，OGD3h，复氧24h的BV2细胞上清液则会加重PCI2细胞的损伤程度，呈现细胞毒性作用，经过花青素预处理的BV2细胞上清液会减缓这种损伤。这说明过度活化的小胶质细胞会加重神经元的损伤，花青素能通过抑制

7、小胶质细胞活化对受损神经元起到一定的保护作用。以上结果表明，花青素对脑缺血再灌注的小鼠和神经细胞都具有一定的神经保护作用，其具体的作用机制可能是因为花青素可以增加细胞的抗氧化能力、清除自由基的能力及抗炎能力，从而减少神经细胞的损伤。关键词：花青素；脑缺血再灌注；炎症；0GD／R；小胶质细胞大连理工大学硕士学位论文Neuro—protectiveEffectsofAnthocyaninsonCerebralIschemiaReperfusionInjuryAbstrac