大豆卵磷脂、胆固醇及其交互作用对半滑舌鳎稚鱼(cynoglossus semilaevis günther)生长、消化酶活力及相关基因表达的影响

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1、谨以此论文献给我的家人、导师和朋友们---------------韩冰2013年3月大豆卵磷脂、胆固醇及其交互作用对半滑舌鳎稚鱼(CynoglossussemilaevisGünther)生长、消化酶活力及相关基因表达的影响摘要以我国重要海水肉食性养殖鱼类半滑舌鳎（CynoglossussemilaevisGünther）为实验对象，在室内流水养殖系统中进行摄食生长试验，研究大豆卵磷脂、胆固醇及其交互作用对半滑舌鳎稚鱼生长和消化酶活力的影响，在此基础上进一步探究饲料磷脂含量对磷脂合成机制的影响。本文的研究内容和主要研究结果如下：1、大豆卵磷脂对半滑舌鳎稚鱼生长和消化酶活力的影响以初始体重为(

2、57±0.3）mg，初始体长为（2.19±0.2）cm的30日龄半滑舌鳎（CynoglossussemilaevisGünther）稚鱼为对象，研究饲料中不同含量的大豆卵磷脂对半滑舌鳎稚鱼生长和消化酶活力的影响，进而确定其对大豆卵磷脂的最适需求量。分别在基础饲料中添加0.0%、2.5%、5.0%、7.5%和10.0%的大豆卵磷脂（实测值分别为：2.87%、4.59%、6.36%、8.75%和11.33%）配制成等氮等能的人工微粒饲料，分别投喂30日龄的半滑舌鳎稚鱼，并以投喂生物饵料组作为对照组,养殖周期为30d。试验结果表明随着饲料磷脂含量的升高，试验鱼的生长（终末体长和特定生长率）呈先升高

3、后降低的趋势。投喂磷脂含量为5%的饲料组（PL5）的终末体长及特定生长率均显著高于磷脂含量为0%、2.5%饲料组及生物饵料组（P<0.05）。随着磷脂含量的升高，存活率逐渐升高，但添加磷脂各饲料组差异均不显著（P>0.05）。投喂磷脂含量为5%的饲料组肠段及胰段的蛋白酶、肠段及刷状缘膜的碱性磷酸酶及亮氨酸氨肽酶均显著高于未添加磷脂饲料组及生物饵料组（P<0.05），淀粉酶及脂肪酶的变化趋势则正好相反。综上结果表明饲料中适宜含量的磷脂可以显著提高半滑舌鳎稚鱼的生长、存活及消化酶活力。以SGR为评价指标，根据折线模型得出半滑舌鳎稚鱼对饲料中大豆卵磷脂的最适需要量为5.76%。I2、磷脂与胆固醇对

4、半滑舌鳎稚鱼生长及消化酶活力的影响以初始体重为(57±0.3）mg，初始体长为（2.19±0.2）cm的30日龄半滑舌鳎（CynoglossussemilaevisGünther）稚鱼为对象，研究饲料中磷脂、胆固醇及其交互作用对半滑舌鳎稚鱼生长及消化酶活力的影响。采用3×3双因素试验设计，在基础饲料中添加梯度磷脂（0%、5%和7.5%）和胆固醇（0%、1%和1.5%）配制成9种等氮等能的人工微颗粒饲料。每组饲料分别随机投喂三组试验鱼，每桶试验鱼为120尾,养殖周期为30d。试验结果表明：饲料中磷脂和胆固醇含量显著影响了半滑舌鳎稚鱼的生长，且两者交互作用显著（P<0.001）。其中磷脂含量为5

5、%和胆固醇含量为0%饲料组的特定生长率（SGR）和终末体重均显著高于其余各饲料组（P<0.05），而随着饲料胆固醇含量升高，鱼体SGR及终末体重均显著下降（P<0.05）。饲料中磷脂和胆固醇含量显著影响了半滑舌鳎稚鱼的消化酶活力，且两者交互作用显著（P<0.001）。饲料胆固醇含量为1%和1.5%时胰蛋白酶（胰段和肠段）、碱性磷酸酶和亮氨酸氨肽酶（肠段和刷状缘）活力均显著低于胆固醇含量为0%组（P<0.05），且当磷脂含量为5%，胆固醇含量为0%时消化酶活力显著高于其余各组（P<0.05）。胰段及肠段的淀粉酶的变化趋势正好相反。综上所述，对于半滑舌鳎稚鱼而言，饲料中添加磷脂可以起到节约胆固醇

6、的作用，饲料中单独添加适宜含量（5%）的磷脂即可满足半滑舌鳎稚鱼的生长发育需求。3、半滑舌鳎CCT基因的克隆、序列分析以及不同磷脂含量对半滑舌鳎稚鱼CCTmRNA表达量的影响利用同源克隆技术和RACE技术从半滑舌鳎（CynoglossussemilaevisGünther）肝脏中成功扩增出CTP:磷酸胆碱胞苷转移酶（CTP:phosphocholinecytidylyltransferase，CCT）cDNA的全序列。CCT基因cDNA全长序列为2428bp（GenbankNo:KC477399），其中包括一个有1122bp的开放阅读框且编码373个氨基酸，预测分子量约为42.81kDa，理

7、论等电点为6.3。BLAST分析显示半滑舌鳎CCT基因与其它已知脊椎动物具有高度同源性，且N-端和C-端中间区域高度保守，仅连接N-端和C-端附近变异较大。实时定量PCR技术检测了饲II料中磷脂含量对半滑舌鳎内脏团CCT基因mRNA表达量的影响。结果表明，CCT的表达量随饲料磷脂含量的升高（2.5%-7.5%）而显著降低(P<0.05)。生物饵料组的CCT表达量显著低于各饲料组(P<0.05)。研究结果表明，