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1、晶体氨基酸替代鱼粉对半滑舌鳎稚鱼的消化影响 半滑舌鳎(CynoglossussemilaevisGünther)属鲽形目,舌鳎科,舌鳎属,俗称牛舌头、鳎目、鳎米,为温水性近海底层鱼类,在我国沿海均有分布,尤以渤海、黄海为多[1,2],是一种高档的经济海产品,其肉质鲜美,深受消费者喜爱.半滑舌鳎育苗生产主要依靠轮虫、卤虫等生物饵料,其转饵期间会出现大规模死亡,主要原因可能是生物饵料营养不平衡,仔稚鱼消化系统尚未发育成熟,对饵料的消化吸收能力差等原因. 在仔稚鱼个体发育的早期,消化系统尚未发育成熟,尤其是对蛋白质的消化能力比较低,无法通过对蛋白质的消化吸收
2、来满足自身对氨基酸的需求[3,4].仔稚鱼早期阶段就可以检测到多种消化酶的活性[5,6].仔稚鱼可以通过摄取的食物来调节体内消化酶的分泌水平[7].因此推断在仔稚鱼的饲料中添加一定水平的晶体氨基酸,将有利于促进仔稚鱼消化酶的分泌,并提高对营养物质消化吸收的能力. 不同的消化酶活力变化可以反映出仔稚鱼消化系统的发育状况,而且还可以根据仔稚鱼体内消化酶活性的变化来判断其对饵料的吸收情况.氨基酸代谢酶活性往往是作为鱼体内氨基酸代谢水平的指示器,可以反映出鱼体内氨基酸的代谢情况[8-11].对仔稚鱼消化酶和代谢酶活力的研究,有助于深入了解海水仔稚鱼的生长、摄食、消化功能的
3、发育和完善,并对仔稚鱼人工微颗粒饲料的选择具有重要的意义. 本实验通过研究人工微颗粒饲料中晶体氨基酸替代鱼粉蛋白对半滑舌鳎稚鱼的消化酶和代谢酶活力的影响,进一步探讨晶体氨基酸对鱼粉的最适替代量,对优化饲料成本,保持鱼类良好的生长性能和提高饲料蛋白利用率具有重要意义. 1材料与方法 1.1实验鱼苗与养殖方法 实验在山东省海阳市黄海水产有限公司进行.实验用鱼苗为该场人工繁育的35日龄半滑舌鳎鱼苗,平均体重为(0.094±0.02)g.实验开始时挑选外观正常、体格均匀、健壮的鱼苗2700尾,随机分成18组,每组150尾,分别放于循环水系统中.实验期间
4、,水温控制在24-25℃,pH在7.8-8.0,盐度在29‰-30‰.每桶内设1个充气石,循环水系统.桶内水表面的光强度在白天维持在7.9illi-Qsystem)定容后混合均匀,取2mL溶液至5mL玻璃瓶中并放置于真空干燥箱(VD23,Germany)干燥,干燥完后加2mL超纯水溶解残留物后至瓶内液体全部蒸发,重复3次,然后加2mLloading-buffer溶解残留物,pH为2.0-2.5.上清液用氨基酸自动分析仪(Biochrom30,GE,England)通过柱后衍生法测定氨基酸组成. 分析消化酶活力时,按照Ribeiro,et
5、al.的方法,于0℃的冰上,在解剖镜下将消化道在食道与幽门括约肌的连接处切开获得胰段和肠段,胰段部分包括胰腺、胃和肝脏.胰蛋白酶活力的分析按照Holm,etal.的方法,用Nα–Benzoyl–DL–arginine–p–nitroanilide(BAPNA,B–4875,Sigma)作底物.淀粉酶活力按照Métais和Bieth[17]的方法测定.碱性磷酸酶和亮氨酸氨肽酶酶活力按照Bessey,etal.[18]和Maroux,etal.[19]的方法测定.肠道刷状缘
6、的分离按照Cahu,etal.[20]的方法,将肠段用50mmol/L甘露醇和2mmol/LTris混合溶液匀浆,然后加入0.1mol/L的CaCl2溶液,9000g离心10min,取上清液,340000g离心20min.最后用配制好的0.1mol/LKCl,5mmol/LTris-Hepes和1mmol/LDTT混合溶液溶解沉淀,即分离出肠上皮刷状缘.谷草转氨酶(AST/GOT)和谷丙转氨酶(GPT/ALT)采用赖氏法测定.活力用比活力表示(mU/mgprotein).蛋白浓度的测定参照Bradford[21]的方法,用牛血清蛋白(BSA,A–2153
7、,Sigma)作底物.测定时先将样品用5倍体积(v/adzu,UV–2401PC)进行分析. 1.4统计方法采用SPSS17.0对所有数据进行单因素方差(ANOVA)分析,若各处理组之间差异达到显着(P<0.05),则进行Tukey多重比较.分析结果均用平均值±标准误表示. 2结果 2.1晶体氨基酸替代鱼粉蛋白对半滑舌鳎稚鱼的消化酶活力的影响. 在不包膜条件下,各处理组的胰段胰蛋白酶活力随替代水平的升高显着下降,包膜处理组(C-25%CAA处理组)(22.36mU/mgprotein)与全鱼粉组(22.17mU/mgpro
