夏枯草提取物对mdr-tb感染小鼠细胞免疫的调节作用

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1、中图分类号：墅窆2：窆论文编号：学科分类号：三!Q：丝密级：坌珏安徽理工大学硕士学位论文夏枯草提取物对MDR-TB感染小鼠细胞免疫的调节作用作者姓名：蠢蒸专业名称：鱼瘗堂研究方向：邀生塑盛鎏皇鱼瘗导师姓名：睦至副塾援导师单位：室筮理工太堂医堂瞳答辩委员会主席：奎麴昌．论文答辩日期：2013年5月31日安徽理工大学研究生处2013年5月30日ADissertationinPathogenBiologyandImmunology_EffectsoftheextractofPrunellaVulgarison

2、cellularimmunityinducedby—～R_TBinratstmmum钾inuceDyNil)inrats量【_lBCandidate：QinRuiSupervisor：LuJunMedicalSchoolAnHuiUniversityofScienceandTechnologyNo．168，ShungengRoad，Huainan，232001，P．R．CⅢNA独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方以

3、外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塞筮堡王太堂或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：赵吼2生年』月阜日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塞擞堡三盘堂有保留、使用学位论文的规定，即：研究生在校攻读学位期间论文工作的知识产权单位属于安徽堡王太堂。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阙。本人授权安徽理工大学可以将学位论文的全部或部分

4、内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者张耘签字日期：砂-)年石月J1日导师签名：∥々签字目期：w哆年f月，，7日摘要目的探讨夏枯草提取物对结核病患者感染的耐多药结核分枝杆菌(multipledrugsresistantbacillustuberculosis，MDR-TB)感染小鼠免疫功能的调节作用，并对其作用机理进行初步探索，在多耐药结核病的临床方案的制定上具有重要的参考价值，并有利于推动中药的现代化研究。方

5、法(1)收集典型尘肺结核病人的痰标本，进行耐多药结核分枝杆菌(MDR-TB)培养和鉴定；提取MDR-TB菌株的DNA，应用PCR技术扩增katG、rpoB和rpsL耐药基因，DNA单链构象多态性分析(SSCP)检出MDR-TB阳性标本。(2)制作MDR-TB感染小鼠的模型，采用酶联免疫吸附(EUSA)法检测中药提取物对血清中结核免疫相关的细胞因子IFN-，／、IL一4、IL．10、IL．12含量的变化，同时分离出单个核细胞，抽提全部RNA，采用RT-PCR法检测单个核细胞中IFN一‰IL一4、IL一10

6、、IL．12及GLS的mRNA变化。结果(1)在194尘肺结核标本中，共检出结核分枝杆菌细菌型104例，总检出率为53．61％(104／194)。采用AST法检测INH、RFP和SM的耐药，检出率分别为76．92％(80／104)、90．38％(94／104)和50．00％(52／104)，其中多耐药株80例(76．92％)，包括同时耐三种药的42例(40．38％)，耐两种药的38例(36．54％)，单耐药株24例(23．08％)，耐药率100％。采用PCR-SSCP方法检测katG、rpoB、啦sL基

7、因，突变率分别为57．70％(60／104)、65．38％(64／104)、40．38％(42／104)。PCR．SSCP方法检测出3个基因联合突变的有30株(30／104，28．84％)，与药敏实验的符合率为71．43％(30／42)，检出2个基因突变的有32株(32／10430．77％)，符合率为84．21％(32／38)，检出1个基因突变的有12株(12／104，11．54％)，符合率为50．00％(12／24)。耐药株中有20株katG基因检测阴性，30株rpoB基因阴性，10株rpsL基因阴性

8、。(2)ELISA实验结果表明，夏枯草提取物组小鼠血清中的IFN一7为2．01士0．73pg／ml、IL．4为6．014-1．46pg／rul、IL一10为12．09-士=3．07pg／rIll、IL一12为2．99士0．89pg／na，与模型组比较，IFN-I'、IL．12含量明显升高，IL．4、IL．10含量明显下降(P<0．05或P<0．01)。在mRNA表达水平，IFN吖、IL．12、GLS表达明显升高，IL．4、IL．10mRNA