狼毒提取物对mdr-tb感染小鼠细胞因子的作用

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1、狼毒提取物对MDR-TB感染小鼠细胞因子的作用胡娟1,2陆军1秦蕊1,3叶松1邓云1(1安徽理工大学医学院安徽淮南232001；2连云港市第二人民医院江苏连云港222000)(3中国人民武装警察8720部队医院江苏无锡214063)【摘要】目的探讨狼毒提取物对结核病患者的耐多药结核杆菌(multipledrugsresistantbacillustuberculosis,MDR-TB)感染小鼠免疫功能的调节作用。方法采用MDR-TB菌液灌胃制备小鼠MDR-TB感染模型，将30只健康雄性小鼠随机分为3组，每组1

2、0只，正常组、模型组和狼毒提取物组，采用EUSA法检测小鼠血清中与结核细胞免疫密切相关的细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-10、IL-12含量的变化。结果狼毒提取物组小鼠血清中的IFN-γ含量为1.94±0.59pg/mL、IL-4为6.15±1.44pg/mL、IL-10为12.54±3.78pg/mL、IL-12为2.89±0.75pg/mL,与模型组比较，IFN-γ、IL-12含量明显升高，IL-4、IL-10

3、含量明显下降(P<0.05)。结论狼毒提取物可明显增强小鼠的细胞免疫功能，为临床应用治疗耐多药结核病提供了理论依据。【关键词】狼毒提取物MDR-TB细胞因子免疫功能结核病是严重威胁人类健康的感染性疾病之一，曾一度得到控制。自20世纪80年代以来，因为滥用抗结核药物和艾滋病病毒(HIV)等感染而导致全球性结核病疫情回升［1］，耐多药结核分枝杆菌(MDR-TB)成为临床治疗的难点。狼毒(StellerachamaejasmeL.)具有治散播结，杀虫作用，临床上用于治疗肿瘤、结核病等，取得一定疗效［2-3］，

4、但未见免疫机制研宄的报道。木研究从细胞免疫学角度通过狼毒醇提取物对小鼠细胞免疫功能的影响，探讨其对MDR-TB治疗效果，为临床应用治疗耐多药结核病提供理论依据。1材料与方法1.1材料IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12EUSA双抗体夹心试剂盒（深圳晶美公司产品）；EXL808全自动酶标仪（美国Bio-Tek公司产品）；选用昆明种成年小鼠，体S（20±2）g,雄性，由安徽医科大学实验动物中心提供（动物合格证号：皖医实动准第01号）。1.2MDR-TB感染动物模型的建立将安徽理工

5、大学附属医院住院肺结核病人的痰标本接种结核分枝杆菌液体培养基（92-3TB液体培养基），混匀后置37°C培养1〜3周。将转种纯化后的MDR-TB菌落刮取，加无菌生理盐水磨菌制备成lmg/mL的菌液，经尾静脉分次注射2mL菌量感欺小鼠［4】。1.3中药提取物的制备将狼毒中药粗粉，以水为溶剂加热回流提取，过滤，20%乙醇沉淀除去杂质，浓缩，冻干得水提取物；将同批次药材粗粉，以75%乙醇加热冋流提取，浓缩，冻干得醇提取物［5］。1.4实验动物分组将30只小鼠随机分为3组，每组10只。正常组每天正常标准饲料喂养；模型

6、组生理盐水0.5mL灌胃，再喂食标准饲料；狼毒醇提取物组灌服狼毒中药醇提取物，每天按照浓度200mg/kg0.5mL灌胃，再加入标准饲料，连续4周，第4周后处死动物，收取血清（将血液3000rpm×20min,取上清，火活，过滤除菌）［6］。1.5ELISA检测按照IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12的LISA双抗体夹心试剂盒说明进行操作，将待测样品150uL分别加入到预先己用各抗小鼠IFN-γ、IL-4、IL-10和IL-12单克隆抗体包被的酶标板上；将反应板充分

7、混匀后，37°C孵育120min，使标准品、待测样品中的抗原与单抗充分结合；洗板；每孔中加入生物素化的各一抗工作液50uL,37"C孵育60min;洗板；每孔加辣根过氧化物酶标记的Streptavidin抗体工作液100uL，37°C孵育60min，洗板；每孔加入OPD（邻苯二胺）底物工作液lOOuL,置37°C暗处反应5-10min;每孔加入1滴终止液（2mol/LH2SO4）混匀；采用酶标仪在492nm处测各孔吸光度OD值，根据样品OD值在标准曲线图上计算出每ml血清中各细胞因子的含量。1.6资料统计分析

8、实验数据采用统计软件SPSS12.0,所有数据均采用x±s表示，各组间比较运用单因数方差分析进行统计。2结果由表1可见，模型组小鼠与正常组比较，血清中的IFN-γ、IL-12含量明显降低，IL-4、IL-10含量明显升高(P<0.01)o狼毒醇提取物组与模型组比较，血清中的IFN-γ、IL-12含量明显升高，IL-4、IL-10含量明显降低(P<0.