玉竹提取物a对1型糖尿病小鼠血糖及细胞因子的调控作用

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1、玉竹提取物A对1型糖尿病小鼠血糖及细胞因子的调控作用：金艳书庄晓燕　吴学敏李宏伟　刘运芝【关键词】玉竹　　摘要：目的：研究1型糖尿病（DM）的发生与细胞因子作用的关系及玉竹提取物A（EAPAOA）对链脲佐菌素（STZ）诱导的1型糖尿病小鼠（下称STZ小鼠）血糖和细胞因子的影响。方法：昆明小鼠60只，对EAPAOA进行急性毒性实验。采用STZ小剂量多次注射诱导1型糖尿病小鼠模型，正常对照组与DM对照组各1组，实验组分三个剂量腹腔注射等体积EAPAOA，用药4周监测血糖变化，4周后应用ELISA法检测外周血血清IL4、IL10、IFNγ含量。结果：急

2、性毒性实验显示EAPAOA毒性作用很低，LD50=14.5124g/Kg；DM对照组与正常对照组比较IL4、IL10降低，IFNγ升高；实验组与DM对照组比较血糖明显降低，IL4、IL10升高，IFNγ降低。结论：1型DM的发生与细胞因子IL4、IL10降低，IFNγ升高有关，EAPAOA安全范围大，可调节STZ小鼠发病过程中细胞因子水平，干预1型DM发生发展。　　关键词：1型糖尿病；玉竹提取物A；急性毒性实验；细胞因子　　1型糖尿病（diabetesmellitus，DM）是胰岛β细胞进行性损害和胰岛素分泌不足的自身免疫性疾病，其详细的发病机理

3、尚未完全阐明。一般认为其发病除了与遗传因素、环境因素有关外，免疫应答是启动因素，表现为细胞免疫和体液免疫均有异常，而细胞因子在此过程中可能起着主导作用［1,2］。　　玉竹（PolygonatumOdoratum（Mill.）Druce）为百合科黄精属中草药，含有多糖、生物碱、甾体皂甙等。玉竹的干燥根茎，性平、味甘，具养阴、润燥、除烦、生津止渴等功效,有强心、扩张血管、降血糖、降血脂、和抗肿瘤等作用［3~5］。本实验所采用的玉竹提取物A（extractionAofpolygonatumodoratum,EAPAOA）是玉竹的干燥根茎经水醇法（30%

4、乙醇）提取而得，通过观察它对STZ小鼠血糖血清IL4、IL10、IFNγ水平的影响，旨在探讨EAPAOA对STZ小鼠血糖和细胞因子的调控作用。　　1材料和方法　　11材料　　111实验动物　　昆明小鼠60只，雌雄各半，体重18~20g；C57BL小鼠50只，雄性，体重18~20g,购自中国医科大学实验动物中心。　　112主要试剂　　EAPAOA：玉竹产自锦州凌海市温滴楼乡，将2.5Kg玉竹干燥根茎洗净、去须根、切碎，30%乙醇浸提，G4过滤分离，旋转蒸发仪蒸发回收乙醇，得黄棕色沉淀烘箱干燥后成780g浸膏备用，使用前分别配制成所需浓度的溶液，高压

5、灭菌。STZ（美国sigma公司）；小鼠IL4、IFNγ试剂盒（进口分装，北京晶美公司）；小鼠IL10试剂盒（原装进口，美国BenderMedSystems公司）；血糖试纸（美国强生公司）；尿糖试纸（广州越秀东方新科技研究所研制生产）。　　113主要仪器　　血糖仪（OneTouchI型血糖仪，美国强生公司）；酶标仪（DG3022A型，上海）。　　12实验方法　　121急性毒性试验　　60只重约18~20g的健康昆明小鼠(雌雄各半)随机分成6组，每组10只，每只腹腔注射相应剂量的EAPAOA0.5ml。一次性给药后即刻观察中毒症状并记录死亡动物只数

6、。　　122实验动物分组及动物模型制备　　将50只C57BL小鼠随机分为5组，其中实验组分为3个剂量组，以近似LD501/15剂量的1g/Kg作为基础给药量，另取其2倍、4倍量，即：1g/Kg(EAPAOA1组)、2g/Kg（EAPAOA2组）、4g/Kg（EAPAOA3组）；设正常对照组（control）和糖尿病对照组(DM)，每组10只。应用0.1mol/l枸橼酸钠缓冲液（pH4.4）配制成0.4％STZ溶液，按40mg/Kg剂量腹腔注射，每天1次，连续5天，每周分别测血糖、尿糖1次，动态监测1型DM模型的形成，除正常对照组小鼠外（只注射等体

7、积枸橼酸钠缓冲液），其余组制备1型DM模型，以血糖≥11.4mmol/l，尿糖+++以上2周，为模型制做成功［6］。低于此值弃去。小鼠自由饮食、饮水，不限量、标准饲料（锦州医学院实验动物中心提供）。正常对照组与DM对照组，腹腔注射生理盐水0.5ml，每日1次，共4周；EAPAOA1组EAPAOA1g/Kg、EAPAOA2组EAPAOA2g/Kg、EAPAOA3组EAPAOA4g/Kg，分别以等体积0.5ml腹腔注射，每日1次，共4周。　　123血糖、尿糖测定　　空腹血糖测试采用末梢全血快速血糖测定法，剪尾取血，血糖仪检测。尿糖水平采用广州越秀东方

8、新科技研究所研制生产的尿糖试纸检测。用药前及用药过程中每周检测一次，共4周。　　124细胞因子检测　　小鼠死前用摘眼球法取血，4℃离心分