利用可示踪转基因斑马鱼研究原始造血和定向造血的关系及斑马鱼细胞移植方法的建立

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1、《中国图书资料分类法》分类号：R392.6单位代码：10660学号：S100024贵阳医学院2013届硕士学位论文利用可示踪转基因斑马鱼研究原始造血和定向造血的关系及斑马鱼细胞移植方法的建立研究生：黄波导师：何志旭教授舒莉萍副教授年级：2010级专业：免疫学2013年5月14日贵阳医学院2013届硕士研究生论文目录第一章利用可示踪转基因斑马鱼研究原始造血和定向造血的关系摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„3前言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„5材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„8结果„„„„„„„

2、„„„„„„„„„„„„„„„„12讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„20参考文献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„23第二章斑马鱼细胞移植方法的建立摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„26前言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„27材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„29结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„32讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„35参考文献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„37全文小结„„„„„„„„„„„„„„„„„„

3、„„„„38第一章英文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„39第二章英文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„41致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„42略缩词表„„„„„„„„„„„„„„„„„„„44论文原创性声明„„„„„„„„„„„„„„„„45附：综述„„„„„„„„„„„„„„„„„„462贵阳医学院2013届硕士研究生论文利用可示踪转基因斑马鱼研究原始造血和定向造血的关系专业：免疫学研究生：黄波导师：何志旭教授舒莉萍副教授摘要目的本课题利用已建立的可示踪的转基因斑马鱼系TG（zLmo2:Loxp-DsRe

4、d-Loxp-EGFP)和TG(zC-myb:EGFP)，通过实时跟踪观察，从而动态观测原始造血干细胞和定向造血干细胞的迁移过程，以期了解斑马鱼原始造血和定向造血的关系，为进一步研究斑马鱼血液系统发育提供可能的理论依据。方法分别收集红色荧光蛋白（DsRed）标记原始造血干细胞的转基因系TG（zLmo2:Loxp-DsRed-Loxp-EGFP)和绿色荧光蛋白（EGFP）标记定向造血干细胞的转基因斑马鱼系TG(zC-myb:EGFP)自交和侧交的斑马鱼胚胎，于12hpf(hourspost-fertilization，hpf)去卵膜，进行局部麻

5、醉，利用激光共聚焦显微镜对全胚胎进行连续实时的动态扫描,从12hpf开始观察，直至48hpf,期间每隔两小时拍摄一次进行追踪观察。结果（1）红色荧光蛋白（DsRed）标记原始造血干细胞的转基因系TG（zLmo2:Loxp-DsRed-Loxp-EGFP)自交后，观察胚胎发+现lmo2的细胞在14hpf开始表达红色荧光，主要表达的部位是在斑马鱼胚胎的头部中胚层（anteriorparaxialmesoderm,ALM），随后在中间细胞群（intermediate+cellmass,ICM）表达；18-22hpf发现红色荧光标记的lmo2的细胞在

6、ICM区表达逐渐增强，24hpf达到高峰,30hpf在尾部造血组织（caudalhematopoietictissue，CHT）开始表达，持续至48hpf。（2）绿色荧光蛋白（EGFP）标记定向造血干细胞的转基因斑马鱼系TG(zC-myb:EGFP)自交后，观察绿色荧光标记的+c-myb的细胞,24hpf开始表达，最初表达的部位是PBI（posteriorbloodisland，PBI）区，随后在28hpf表达逐渐增强，并沿着AGM区向原肾导管迁移，28hpf在PBI区和AGM区的表达逐渐增强，持续到36hpf；此外发现在28hpf斑马鱼+的

7、头部和胸腺有少量c-myb细胞的存在;32-36hpfPBI区、AGM区和头部的++c-myb细胞逐渐增多；42-48hpf在斑马鱼头部c-myb细胞逐渐减少（3）TG(zLmo2:Loxp-DsRed-Loxp-EGFP：TG(zC-myb:EGFP)侧交的斑马鱼胚胎，观++察发现受精后24小时可以看到PBI区有少量的又红又绿的lmo2和c-myb的双+++阳性细胞和红色的lmo2的细胞；26hpfPBI区lmo2和c-myb双阳性细胞逐渐++增多，28hpflmo2和c-myb双阳性细胞在PBI区逐渐增多并向主动脉-性腺-3贵阳医学院20

8、13届硕士研究生论文++中肾（aorta-gonad-mesonephros，AGM）迁移，30-38hpflmo2和c-myb双阳性++细胞在尾部PBI区逐渐增多