斑马鱼两种转基因方法的比较

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1、万方数据-研究报告·生物技术通报BioTEcHNoLoGYBlILLETIN2011年第12期斑马鱼两种转基因方法的比较柳晓瑜王豪博仇雪梅于旭蓉刘洋王秀利(大连海洋大学生命科学与技术学院，大连116023)摘要：对斑马鱼(Daniorerio)的两种转基因方法进行比较，分别采用显微注射和电脉冲导入法将携带有GFT报告基因的表达载体质粒导入斑马鱼受精卵。得出电脉冲最佳导入条件为最适电压125V／era，电阻50Q．最佳导入时期为l一2细胞期(40—50rain)，以及最佳外源基因浓度为300n咖L。利用两种方法均得到转GFP

2、基因的斑马鱼。而两种方法对比的结果表明，显微注射法耗时费力，但转基因阳性率高；电脉冲法一次可以处理大批量受精卵。但转基因阳性率远低于显微注射法。关键词：斑马鱼显微注射电脉冲导入法转基因效率．StudiesonTwoMethodsforTansgenicZebrafishLiuXiaoyuWangHaoboQiuXuemeiYuXurongLiuYangWangXiuli(CollegeofLifeScienceandTechnology。DalianOceanUniversity．Dalian116023)Abstract

3、：Thispapercomparedandresearchtherelativeefficiencyofgenetransferintozebratishbymicroinjeetianandelectroporation．Theelectroporationconditionsfieldstrengthof125V／cm。resistanceof50n。optimalperiodofoneandtwocellstage(40—50rain)offertilizedfisheggsandforeignDNAconcentr

4、ationof300ng／I．tLwereappliedformas8genetransfer．Wecanobtaintranseniezebrafishbymicroinjectionandelectroporation．Theresultshowedthatthemicroinjectionhavehishpositiverate，butdifficultandtime-consuming．Whiletheelectroporationcanhandlealargenumberofzygotesonetimebutha

5、velowpositiverate．Keywords：ZebrafishMicroinj∞tionElectroperationTransgenicefl3ciency自20世纪80年代首批转基因鱼诞生以来⋯，世界范嗣内掀起了转基因鱼研究的热潮，很多实验室都进行了一系列的转基因鱼的研究L2J。目前，已有多种转基因技术应用于转基因鱼的培育和品种改良。其中显微注射应用的最为广泛，1984年，我国科学家朱作言¨o应用显微沣射的方法将人的生长激素基因注射到了鱼的受精卵原核，获得了生长速度快的转基因鱼。之后显微注射技术被广泛应用，并

6、日益改进和完善。其次，电脉冲基因导人法和精子介导法在鱼类转基因的研究中也被大量使用。Aliye等

7、31应用电脉冲基因导入法将Cecmpins基因导人青鲻受精卵中，得到了少量的转基因个体，但检测结果显示。这些阳性个体的抗菌活性明显高于对照组。应用精子一电脉冲导入法则得到了较高阳性率的转基因贝类H别和鲍类L6j。此外，反转录病毒介导法[7】、脂质体介导法[8】、基因枪法【9o等方法各有优点，但也存在诸多不足之处¨0』。就显微注射法而言，虽然转基因阳性率高，但对实验者技能要求高，需要精密的仪器和设备，耗时费力¨¨。而相比电脉冲基

8、因导入法，虽然其基因导入阳性率低，但一次可以处理大批量的卵，对实验者技能要求低，省时省力【12]o本试验使用显微注射和电脉冲导入法将外源基因导入斑马鱼的受精卵中。对电脉冲导入法所需的条件进行了优化，并与显微注射法进行了比较，旨在找出电脉冲导入法的最佳导入条件，为大批量生产转基因鱼奠定基础。1材料与方法1．1材料斑马鱼(Daniorerio)购自大连香炉礁花鸟鱼收稿口期：201i-05-03作者简介：柳晓瑜．女，硕士研究生．研究方向：生物化学与分子生物学；E-maihliuxiaoyul961@163．corn通讯作者：仇雪

9、梅。女．博：￡，教授，研究方向：海洋生物技术；E-mail：xmqiu@dlou．edu．corn万方数据生物技术通报BiotechnologyBulletin2011年第12期市场，pAcGFPI．NI表达载体购自Clontech公司，EcoliDH5a由本实验室保存，显微注射装置由中科院水生所自主研