纳豆激酶的酶学特性及其微胶囊的制备研究

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1、硕士学位论文纳豆激酶的酶学特性及其微胶囊的制备研究STUDIESONENZYMATICPROPERTIESOFNATTOKINASEANDPREPARATIONOFMICROCAPSULES程云哈尔滨工业大学2015年6月国内图书分类号：TS235.1学校代码：10213国际图书分类号：664密级：公开工学硕士学位论文纳豆激酶的酶学特性及其微胶囊的制备研究硕士研究生：程云导师：马莺教授申请学位级别：工学硕士学科、专业：化学工程所在单位：化工学院答辩日期：2015年6月30日授予学位单位：哈尔滨工业大学ClassifiedIn

2、dex:TQ468.1U.D.C:619DissertationfortheMasterDegreeinEngineeringSTUDIESONENZYMATICPROPERTIESOFNATTOKINASEANDPREPARATIONOFMICROCAPSULESCandidate:ChengYunSupervisor:Prof.MaYingAcademicDegreeAppliedfor:MasterofEngineeringSpecialty:ChemicalEngineeringAffiliation：Schoolo

3、fChemicalEngineeringandTechnologyJune,30th,2015DateofDefence:Degree-Conferring-Institutio:HarbinInstituteofTechnology哈尔滨工业大学工学硕士学位论文摘要纳豆激酶是由枯草芽孢杆菌产生的一种丝氨酸蛋白酶，它主要的功能是溶解血栓，也作为新一代的溶栓药物得到相应的发展与研究。本文主要对纳豆激酶的酶学特性以及海藻酸钠对其包埋制备微胶囊的工艺优化以及微胶囊稳定性的研究。采用SDS-PAGE法以及Zeta电位法分别测得纳豆激

4、酶的分子量为28kDa以及等电点为8.58。采用纤维蛋白-琼脂糖平板法测定纳豆激酶的酶活，得到纳豆激酶的酶活为62520U/g。纳豆激酶在不同的加热温度时，温度越高，其酶活越低。在pH6.5的缓冲溶液中，纳豆激酶的相对酶活为最高。在40℃的水浴中，保温不同的时间，纳豆激酶在保温60min时，达到最高的酶活。NaCl在浓度低于1.35mol/L时，对纳豆激酶的酶活起到促进作用，但是高于此浓度时，纳豆激酶的酶活明显的受到了抑制；Mg2+、Ca2+对纳豆激酶有促进作用；Cu2+、Zn2+对纳豆激酶的活性有抑制作用；Fe2+对纳豆激

5、酶的抑制作用，即使在较低的浓度时对纳豆激酶的酶活稳定性的抑制作用也十分的明显。使用海藻酸钠包埋纳豆激酶制备微胶囊的单因素最佳工艺条件是：海藻酸钠的浓度为1.60%，羧甲基纤维素钠的浓度为0.50%，CaCl2浓度为0.30%。正交实验所得的最佳工艺条件是：海藻酸钠的浓度为1.80%，羧甲基纤维素钠的浓度为0.50%，CaCl2浓度为0.30%。对包埋的纳豆激酶与游离状态下的纳豆激酶酶学性质的比较，在不同的温度以及不同的pH下，包埋的纳豆激酶比游离的纳豆激酶的相对酶活要高。并且在酶活温度为50℃时，游离的纳豆激酶的相对酶活是5

6、1.69%，包埋的纳豆激酶的相对酶活为71.67%；在pH8.5的条件下，游离的纳豆激酶的相对酶活是38.09%，包埋纳豆激酶的相对酶活是55.99%。经过包埋的纳豆激酶，其酶活受到了一定程度的保护。因此，经过海藻酸钠包埋的纳豆激酶可以较好的保护酶的活性，免受外界环境的影响。同样，关于混合多糖的研究发现，海藻酸钠/CMC包埋的纳豆激酶，有以下优点：粒径小、外观规则并且酶活的回收率高、硬度强。关键词：纳豆激酶；海藻酸钠；微胶囊I哈尔滨工业大学工学硕士学位论文AbstractNattokinaseisaserineproteas

7、ethatproducedbytheBacillussubtilis,itsmainfunctionistodissolvethethrombus,andalsoasanewgenerationofthrombolyticdrugsgotthecorrespondingdevelopmentandresearch.Thispapermainlystudiestheenzymaticpropertiesofnattokinaseandtheproductionprocessandstabilityofmicrocapsules

8、whichembeddedbysodiumalginate.Themolecularweightofnattokinasewas28kDaandtheisoelectricpointofitwas8.58.Theenzymaticactivityofnattokinasewas62520U