tiam1调控喉癌生长及侵袭转移的体内外实验研究

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1、中图分类号RZ鱼2UDC610博士学位论文学校代码!Q§三三密级公珏Tiaml调控喉癌生长及侵袭转移的体内外实验研究InvestigationofTiamlonthegrowth，invasivenessandmetastasisinlaryngealcarcinomainvitroandinvivo作者姓名：王爽学科专业：临床医学研究方向：耳鼻咽喉科学学院(系、所)：湘雅二医院指导教师：杨新明教授答辩委员会主席√喇／中南大学二0一三年五月博士学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作

2、及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特另ll；bn以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：皇壅日期：丝年』月生日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授

3、权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。年S只沙E1年尘月竺博士学位论文中文摘要Tiaml调控喉癌生长及侵袭转移的体内外实验研究中文摘要第一章Tiaml在喉癌中的表达及其临床意义目的：检测T淋巴细胞侵袭转移诱导因子1(Tiaml)蛋白在喉癌组织中的表达，并探讨其表达水平与喉癌临床病理特征和预后之间的关系。方法：采用免疫组织化学染色技术检测Tiaml蛋白在98例喉癌石蜡组织切片中的表达，并统计分析Tiaml蛋白表达水平与喉癌临床病理特征和预后之间的关系；另外

4、，运用Westernblot检测Tiaml蛋白在12例配对的喉癌组织及癌旁黏膜组织中的表达。结果：Tiaml蛋白的表达与喉癌的淋巴结转移(P<0．001)、临床分期(I期+II期／III期+Ⅳ期)(P=0．027)、组织病理学分级(P=0．020)及复发(P=0．003)密切相关；Kaplan．Meier生存曲线分析结果显示Tiaml高表达组的5年无复发生存率(P=0．001)和5年总生存率(P<0．001)均明显低于Tiaml低表达组；而且通过Kaplan．Meier生存曲线分析Tiaml蛋白表达和淋巴结转移情况与头

5、颈鳞癌患者预后之间的关系，发现Tiaml高表达并有淋巴结转移组的5年无复发生存率和5年总生存率明显低于其它(Tiaml低表达或无淋巴结转移)组(P均<0．001)；多因素Cox比例风险回归模型进一步显示，淋巴结转移(P=0．001)及Tiaml表达水平(P=0．020)为喉癌的独立预后因博士学位论文中文摘要素。Westernblot结果显示Tiaml蛋白在喉癌组织中的表达水平均高于癌旁黏膜组织(P<0．001)。结论：Tiaml在喉癌组织中表达显著升高，且其高表达与喉癌患者的淋巴结转移、复发及预后密切相关。Tiaml可

6、能在喉癌的发生、发展中起重要作用，其表达水平对喉癌的复发及预后具有评估价值。第二章Tiaml调控喉癌细胞增殖及侵袭转移的体外实验研究目的：我们前期的研究表明Tiaml蛋白在喉癌组织中有表达，并与患者的临床分期、淋巴结转移、复发及预后密切相关。因此，该部分将上调Tiaml在喉癌细胞株中的表达，并观察Tiaml基因表达上调后对喉癌细胞体外增殖、迁移和侵袭能力等生物学行为的影响。方法：利用Tiaml／C1199质粒转染喉癌Hep．2细胞，G418筛选Tiaml基因稳定高表达的人喉癌Hep．2细胞，Westernblot、细胞

7、免疫荧光及细胞免疫组化检测转染效果；通过MTT、平板克隆形成实验、流式细胞术、细胞划痕实验及Transwell侵袭实验观察Tiaml过表达后对Hep．2细胞的体外增殖能力、迁移及侵袭能力的影响。结果：Tiaml／C1199质粒成功转染入Hep．2细胞，G418筛选后成功构建出Tiaml稳定高表达的Hep．2细胞(Hep一2／Tiaml)。与对照组Hep-2及转染空载体的Hep一2细胞(Hep．2／Mock)比较，各组之间细胞的增殖能力无明显差异(P>O．05)，处于Gl期、S期和G2期的细胞比率亦无明显统计学差异(P>

8、0．05)，而Hep．2／Tiaml的凋亡率与Hep-2及Hep-2／Mock相比则有明显下降(2．504-1．33VS．5．614-博士学位论文中文摘要1．08，5．834-1．02)(P=0．021)。划痕48小时后Hep．2／Tiaml细胞的迁移距离明显多于Hep．2及Hep一2／Mock(147．004-26．06VS．8