噪声刺激前后mn-sod在大鼠螺旋神经节表达与活性的区域性差异

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1、第四军医大学硕士学位论文NIDnoiseinduceddeafness噪声性聋NIHLnoiseinducedhearingloss噪声性听力损失OFRoxygenfreeradical氧自由基OHCouterhaircells外毛细胞PBSPhosphatebuffersolution磷酸盐缓冲液PMSFPhenylmethanesulfonylfluoride苯甲基磺酰氟Prdxsperoxiredoxins过氧化物酶系家族PTSpermanenthresholdshift永久性阈移PVDFPolyvinyliden

2、eFluoride聚偏氟乙烯RNARibonucleicAcid核糖核酸RNSReactiveNitrogenSpecies活性氮ROSReactiveOxygenSpecies活性氧SDSSodiumdodecylsulfate十二烷基磺酸钠SPLSoundpressurelevel声压级TBS-TTrisBufferedSaline,withTween-20三乙醇胺缓冲盐水溶液TEMEDN,N,N',N'-TetramethylethylenediamineN,N,N',N'-四甲基乙二胺TTStemporaryth

3、resholdshift暂时性阈移-2-第四军医大学硕士学位论文噪声刺激前后Mn-SOD在大鼠螺旋神经节表达与活性的区域性差异硕士研究生：崔勇导师：邱建华教授辅导教师：陈福权副教授第四军医大学西京医院耳鼻咽喉头颈外科科，西安710032资助基金项目：国际（地区）合作与交流项目（81120108008）中文摘要关键词：螺旋神经节；锰超氧化物歧化酶；噪声性聋1目的感音神经性聋是耳科常见的疾病，高频区听力易损性是其最显著的特点。有研究显示，感音神经性聋的发生与耳蜗感觉神经细胞的氧化损伤存在着密切的关系。而螺旋神经节细胞作为耳蜗

4、内重要的感觉神经细胞虽然在感音神经性聋发生的早期往往没有明显的形态学损伤，但其同样受到了氧化应激作用的影响，致使氧化应激相关分子的表达与性质发生了变化。且这种变化在螺旋神经节的不同区域之间存在着差异。其中抗氧化剂的区域性分布差异及活性变化体现了不同区域的细胞抗氧化能力的差异。本研究中，我们主要验证了在噪声刺激前后线粒体内抗氧化酶锰超氧化物歧化酶（Mn-SOD）在大鼠螺旋神经节不同区域表达和活性的差异与高频听力易损性在区域上的相关性。2方法本实验通过给予白噪声115dB2h连续3d，建立SD大鼠噪声性聋的动物模型，-3-第

5、四军医大学硕士学位论文ABR测听分析不同频率的噪声损伤情况;免疫组织化学染色法和western-blot分析噪声暴露前后Mn-SOD在螺旋神经节不同区域的表达水平;黄嘌呤氧化酶法检测Mn-SOD在螺旋神经节不同区域的活性及变化趋势；荧光实时定量PCR技术来测定噪声刺激前后Mn-SOD的mRNA在螺旋神经节不同区域的表达差异。3结果ABR测听结果显示：大鼠噪声暴露后第1、3、14d与暴露前1d相比，4、8、16、20、32kHz的ABR阈值均明显上移，而且以高频区听阈变化更为显著；免疫组织化学染色及western-blot

6、结果显示：在正常对照组中,顶部螺旋神经节的Mn-SOD的表达较底部明显；而噪声暴露后，Mn-SOD在螺旋神经节的表达较对照组相应部位均显著增高；且顶部较底部的表达仍然更为显著；黄嘌呤氧化酶法Mn-SOD活性测定结果显示：在正常情况下,顶部螺旋神经节的Mn-SOD活性与底部相比无统计学差异，而在噪声暴露后，Mn-SOD的活性则较对照组相应部位均有降低，而且底部较顶部的变化更为显著；荧光实时定量PCR结果显示：在正常情况下,顶部螺旋神经节的Mn-SODmRNA的表达较底部明显；而噪声暴露后，Mn-SODmRNA在螺旋神经节的

7、表达较对照组相应部位均显著增高；且顶部仍较底部的表达量更大。4结论以往研究表明，在噪声性耳聋的早期，以底回外毛细胞的损伤为主，而螺旋神经节则没有发生明显的形态学改变。然而，我们的研究表明，噪声刺激同样在早期既可引起对螺旋神经节细胞的氧化应激作用，并导致螺旋神经节细胞内相关的抗氧化酶类表达水平发生了改变。而且表现为顶部螺旋神经节细胞的抗氧化能力显著高于底部。抗氧化能力的区域性差异与噪声性耳聋的高频听力易损性的特点，以及其对应的毛细胞损伤区域相一致。这一现象，为今后进一步研究噪声性耳以及聋感音神经性聋的氧化损伤机制及高频听力

8、易损性的影响因素提供了新的思路。-4-第四军医大学硕士学位论文TheRelationshipbetweenRegionalDistributionofManganeseSuperoxideDismutase(MnSOD)inSpiralGanglionCellsofRatsandNoise-inducedHearin