gdnf在慢性收缩性损伤大鼠脊髓背根神经节中的蛋白表达

《gdnf在慢性收缩性损伤大鼠脊髓背根神经节中的蛋白表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、GDNF在慢性收缩性损伤大鼠脊髓背根神经节中的蛋白表达作者：夏小萍，马正良，朱巍，周锦勇【摘要】目的探讨胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)在慢性收缩性损伤(CCI)所致神经病理性疼痛大鼠的L4背根神经节中的蛋白表达。方法实验1：24只SD大鼠，随机分为正常组(Naive组)、假手术组(Sham组)和CCI组(每组n=8)。Naive组不做任何手术;Sham组仅暴露坐骨神经;CCI组按Bent法结扎右侧坐骨神经主干制备CCI模型。分别测定Sham组和CCI组术前2天(基础值)及术后第1、3、5、7、14、21天(Naive组则在相对应的时间点)大

2、鼠同侧(本实验为右侧)后足机械缩足反射阈值(Mechanicalentandpaeasured2daysbeforesurgery(baseline)and1,3,5,7,14and21daysafteroperation(easuredatthecorrespondingtimepoints).Experiment2:18Sprague-DaandCCIgroups(n=6each).Theanimalmodeloved;intheNaivegrouptheratsunderoved,andintheShamgrouptherightsciat

3、icnerveinedby组)和CCI组(每组n=6)。Naive组不做任何手术，直接取右侧L4背根神经节;Sham组仅暴露坐骨神经，术后第7天处死大鼠取同侧L4背根神经节;CCI组制备CCI模型于术后第7天处死大鼠取同侧L4背根神经节，采用in，取上清液，4℃105g离心1h。离心沉淀加入匀浆液，沉淀充分溶解后在4℃105g离心1h，上清即为胞膜蛋白。　　1.3.2电泳、条带分析按Bradford法测定样本蛋白浓度后，加入1/4体积的5倍样本缓冲液，95℃水浴变性5min。取等量40μg蛋白样本加至12%SDS-聚丙烯酰胺凝胶上恒压电泳，湿转法

4、转移至硝酸纤维素膜。分别加入5%脱脂奶粉TBST配制的一抗(1∶200兔抗鼠GDNF,SantaCruz公司)，在摇床平台上于室温孵育4h，TBST漂洗滤膜3次，每次10min。再加入小牛抗兔二抗(1∶500,SantaCruz公司)，于37℃平缓摇动温育1h。采用增强化学发光法(ECL)检测信号。滤膜浸入含化学发光试剂A、B的水溶液中激发荧光，拍摄并扫描照片。反应条带作半定量分析。　　1.4统计学处理数据均以±s表示，所得数据经SPSS13.0软件处理，组内比较用t检验，组间比较用单因素方差分析(ANOVA)，P<0.05认为差异有显著性

5、。　　2结果　　2.1各组大鼠M]//赵志奇.疼痛及其脊髓机理.上海：上海科技教育出版社，2000:83-144.　　[4]BridgesD,ThompsonSechanismsofneuropathicpain[J].BrJAnaesth,2001,87(1):12-26.　　[5]FukuokaT,KobayashiK,YamanakaH,etal.parativestudyofthedistributionoftheα-subunitsofvoltage-gatedsodiumchannelsinnormalandaxotomizedrat

6、dorsalrootganglionneurons[J].JpNeurol,2008,510(2):188-206.　　[6]HkeA,HoT,Craotesmyelinationinunmyelinatednervefibers[J].JNeurosci,2003,23(2):561-567.　　[7]CharbelIssaP,LeverIJ,MichaelGJ,etal.Intrathecallydeliveredglialcellline-derivedneurotrophicfactorproduceselectricallyevoke

7、dreleaseofsomatostatininthedorsalhornofthespinalcord[J].JNeurochem,2001,78(2):221-229.