dmbc对大鼠局灶性缺血性脑损伤的保护作用及其机制

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1、同等学力人员硕士学位论文论文题目DMBC对大鼠局灶性缺血性脑损伤的保护作用及其机制研究生姓名李翔指导教师姓名张慧灵专业名称药理学研究方向神经药理论文提交日期2013年10月DMBC对大鼠局灶性缺血性脑损伤的保护作用及其机制中文摘要DMBC对大鼠局灶性缺血性脑损伤的保护作用及其机制中文摘要目的：2-(3′,5′-dimethoxybenzylidene)cyclopentanone(DMBC)是我们课题组合成的一个新型小分子化合物，本实验观察DMBC对大鼠局灶性缺血性脑损伤的保护作用及其机制。方法：采用大鼠永久性大脑中动脉阻塞(permanentmi

2、ddlecerebralarteryocclusion,pMCAO)方法，建立脑缺血的大体模型。大鼠脑缺血后1h或缺血后6h腹腔给予DMBC，以脑梗塞体积和行为学症状等指标及WesternBlot法检测DMBC对缺血皮层神经元标记物MAP2蛋白表达水平的影响来评价DMBC对缺血脑组织的神经保护作用。采用小鼠海马神经元细胞系HT-22细胞氧糖剥夺(oxygen-glucosedeprivation，OGD)方法，建立脑缺血的细胞模型。光镜法和LDH法分别检测OGD诱导的HT-22细胞形态学的变化和乳酸脱氢酶漏出率；WesternBlot法检测活性ca

3、thepsinB蛋白表达，免疫荧光法检测cathepsinB蛋白在HT-22细胞中的分布情况。结果：在大鼠局灶性脑缺血体内模型上，DMBC（1、5、25mg/kg）可显著减小脑梗塞体积和改善行为学症状以及上调缺血皮层MAP2蛋白的表达水平（P<0.01)。在HT-22细胞OGD模型上，LDH漏出率和光镜结果显示：DMBC(0.1、1、10、50μM)可降低OGD后HT-22细胞的LDH漏出率（P<0.01)，可显著增加HT-22细胞的细胞数；DMBC对未进行OGD处理的HT-22细胞的LDH漏出率没有任何影响。WesternBlot结果显示DMBC

4、下调活性cathepsinB蛋白表达；免疫荧光结果显示DMBC可抑制OGD诱导的HT-22细胞cathepsinB蛋白从溶酶体进入细胞质。结论：DMBC对大鼠局灶性脑缺血损伤以及OGD诱导的HT-22细胞的损伤有显著的保护作用，其机制可能与抑制cathepsinB蛋白激活有关。关键词：脑缺血；DMBC；神经保护；HT-22cells；pMCAO；OGD；cathepsinB作者：李翔指导教师：张慧灵教授IAbstractProtectionofDMBConFocalCrerebralIschemicInjuryinRatsandItsMechani

5、smProtectionofDMBConFocalCrerebralIschemicInjuryinRatsandItsMechanismAbstractAim:2-(3',5'-Dimethoxybenzylidene)cyclopentanone(DMBC)isanovelsyntheticsmallmoleculecompoundbyourgroup.ToinvestigatetheprotectiveeffectsandmechanismofDMBConfocalcrerebralischemicinjuryinrats.Methods:I

6、nthisstudy,weestablishedtwocerebralischemia-hypoxiamodelsinvivoandinvitro.Permanentmiddlecerebralarteryocclusion(pMCAO)modelwasinducedbyusingintraluminalfilamenttechniqueinrats.HippocampalneuronalcelllineHT-22cellwasexposedtoaparadigmofischemicinsultbyusinganoxygen-glucosedepr

7、ivation(OGD)device.DMBCwasinjectedintraperitoneally(i.p.)1hor6haftertheonsetofischemia.Neurologicaldeficitswereanalyzedbyscoringneurologicaldeficits,gripforceandrightforeclimbuseandbraininfarctionvolumewasassessedwith2,3,5-triphenyltetrazoliumchloride(TTC).TheinjuryofHT-22cell

8、sinducedbyOGDwasdetectedwithLDHassay.Theactiveproteinlevelsof