cathepsin l新型抑制剂clik148对大鼠局灶性缺血性脑损伤的保护作用及其抑制星形胶质细胞死亡的机制

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1、本课题得到下列基金的资助：国家自然科学基金项目(30973510)、苏州中药研究所及教育部留学回国人员基金项目(K513400110)苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。论文作者签名：—牟扯日苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使

2、用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所(含万方数据电子出版社)、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在——年一月解密后适用本规定。非涉密论文口论文作者签名：毖日期：导师签名：1＼Ii≮j遗。验逸．∑j避CathepsinL新型抑制剂Clikl4

3、8对大鼠局灶性缺血性脑损伤的保护作用及其抑制星形胶质细胞死亡的机制中文摘要L新型抑制剂Clikl48对大鼠局灶性缺血性脑损伤的保护作用及其抑制星形胶质细胞死亡的机制中文摘要目的：观察CathepsinL新型抑制剂Clikl48对大鼠局灶性缺血性脑损伤的保护作用及其保护缺血缺氧性星形胶质细胞损伤的机制：抑制CathepsinL．Caspase信号机制的激活。方法：采用大鼠永久性大脑中动脉阻塞(permanentmiddlecerebralarteryocclusion，pMCAO)方法，建立脑缺血的大体模型。大鼠脑缺血前10min或缺血后6h侧脑室给予Cl

4、ikl48，以脑梗塞体积和行为学症状等指标以及Westernblot法检测Clikl48对缺血皮层MAP2蛋白表达水平的影响来评价Clikl48对脑缺血性损伤的神经保护作用。采用原代培养大脑皮层星形胶质细胞氧糖剥夺(oxygen-glucosedeprivation，OGD)方法，建立脑缺血的细胞模型。免疫荧光法和LDH法分别检测OGD诱导的星形胶质细胞GFAP阳性细胞数和乳酸脱氢酶漏出率；采用WestemBlot法和免疫组化法检测体内和体外缺血缺氧对星形胶质细胞CathepsinL和凋亡相关蛋白的表达，以及Clikl48对CathepsinL和凋亡相关

5、蛋白表达的影响。结果：在大鼠局灶性脑缺血体内模型中，Clikl48(12．5、25、50nm01)可显著减小脑梗塞体积和改善行为学体征以及上调缺血皮层MAP2、GFAP蛋白的表达水平(P

6、MCAO大鼠诱导的缺血模型中，WesternBlot结果显示：大鼠大脑缺血皮层活性CathepsinL、tBid、Caspase．3上调以及线粒体的Cyt．C下调和细胞浆中Cyt．C上调。Clikl48给药组可对抗大鼠局灶性脑缺血模型大鼠缺血皮层中活性CathepsinL、tBid、Caspase-3的上调以及线粒体内的Cyt．C下调和细胞浆中中文摘要CathepsinL新型抑制剂Clikl48对大鼠局灶性缺血性脑损伤的保护作用及其抑制星形胶质细胞死亡的机制Cyt．c上调。免疫组化结果显示：大鼠大脑缺血皮层星形胶质细胞中CathepsinL从溶酶体释放到

7、细胞质中以及Caspase．3阳性细胞增多；Clikl48给药组可抑制大脑缺血皮层中CathepsinL释放以及Caspase．3的阳性细胞数目。在OGD诱导的体外缺血模型中，WesternBlot结果显示：星形胶质细胞在OGD后，活性CathepsinL、tBid、Caspase-3上调以及线粒体的Cyt．c下调和细胞浆中Cyt．g上调。WesternBlot结果亦显示：Clikl48可对抗OGD引起的星形胶质细胞中活性CathepsinL、tBid、Caspase．3和Cyt．C蛋白表达的变化。结论：CathepsinL新型抑制剂Clikl48对大鼠

8、局灶性脑缺血和OGD导致的星形胶质细胞损伤有显著保护作用，其作用机制可能与抑制C