安定对大鼠局灶性脑梗死半影区神经细胞死亡的保护作用

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1、安定对大鼠局灶性脑梗死半影区神经细胞死亡的保护作用摘要:目的研究安定对光化学诱发脑梗死后细胞死亡的保护作用.方法使用光化学诱发的大鼠局灶性脑缺血模型.采用原位末端标记技术（TUNEL）检测凋亡细胞.大鼠脑梗死术后存活3，6，12，24，48和72h，分别观察梗死灶坏死中心面积和凋亡细胞数目.术前24h开始腹腔注射安定（10mg・kg-1・8h-1），直到处死动物.结果TUNEL阳性细胞位于坏死中心与正常皮层之间的半影区.TUNEL阳性细胞的均数随着梗死后时间的延长逐渐增多，24h达到高峰.在24h时间点，安定治疗组梗死坏死中心的平均最大面积和TUNEL阳性细

2、胞均数与对照组相比，明显减少（P<0.001）.结论安定可明显减少成年大鼠局灶性脑梗死后的细胞坏死和凋亡.该结果可为临床使用安定治疗缺血性脑血管病提供理论依据.Key;apoptosis;necrosis;cerebralischemia;cerebralinfarction　　Abstract:AIMTostudytheprotectiveeffectsofdiazepamagainstnervouscelldeathafterphotochemicallyinducedcere-bralischemia.METHODSFocalcerebralischemiainducedb

3、yphotothrombosisinadultratsodel.Apop-tosisinaldeoxynucleotidyltransferasemediateddUTP-biotinnickendlabeling（TUNEL）.Theareasofnecroticcoresandthenumbersofapoptoticcells（10mg・kg-1・8h-1）alsalcortex.Themeannum-berofTUENL-positivecellseincreasedfrom3，6to12handpeakedat24h.Themeanmaximuma

4、reaofthenecroticcoresandmeannumberofTUNEL-positivecellsat24h-treatedexperi-mentalgroupthaninthesaline-treatedcontrolgroup.CONCLUSIONDiazepamcansignificantlyreducebothnecrosisandapoptosisfolloiainducedbyphotothrombosisinadultrats.Thesefindingsprovideatheo-reticalinischemiccerebrovasculardiseases.

5、　　0引言　　近年来有研究显示，安定具有保护脑部缺血性神经元，防止其退行性变的作用［1，2］.我们采用大鼠光化学局灶性脑梗死模型，观察安定对大鼠脑梗死后半影区神经细胞凋亡的影响，旨在探索治疗脑梗死的新途径与方法.　　1材料和方法　　1.1材料SD雄性大鼠48只，体质量200～250g，由第四军医大学实验动物中心提供.其中36只大鼠按术后存活3，6，12，24，48和72h随机分为6组，每个时间点6只;另外12只大鼠被随机分为安定治疗组和对照组，每组6只.　　1.2方法　　1.2.1大鼠光化学脑梗死模型动物均采用10g・L-1戊巴比妥钠50mg・kg-1，腹腔

6、注射麻醉，俯卧位固定于脑立体定向仪上（Narishiga，日本）.常规皮肤消毒，正中矢状切开头皮，细心分离部分颞肌以暴露顶叶，光导纤维（孔径3mm）置于前囟后3mm、矢状缝左旁开3mm之交点处，光纤与颅骨表面距离为2mm.其下对应于顶叶感觉皮层（parietalsensorycortex）.光照前1min内自尾静脉注射玫瑰红B（10g・L-1，生理盐水配制），剂量25mg・kg-1.光照强度12，照射时间10min，造成局部皮层缺血梗死［3］.照射过程中颅骨表面温度为（36±1）℃，照射完毕缝合头皮.安定治疗组大鼠术前24h开始腹腔注射安定注射液，剂量10m

7、g・kg-1・8h-1，直至处死动物;对照组将安定换成等量的生理盐水，其余同安定组.　　1.2.2组织处理术后大鼠存活24h，再次麻醉，经升主动脉用生理盐水冲洗，40g・L-1多聚甲醛磷酸盐缓冲液（4℃，pH7.4）灌注固定后取脑，观察梗死灶，而后以200g・L-1蔗糖-PB于4℃浸泡直至沉底.经恒冷箱行冠状连续切片，片厚10μm，取每5张中的第一张，贴于多聚赖氨酸处理的切片上，尼氏染色显