蛋白酶体低活性对nanog阳性肝癌干细胞干性维持的作用机制研究

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1、浙江理工大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得浙江理工大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：拯洲溯签字日期：秒，箩年；月，岁IL--7家查或印学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解逝逛堡兰太堂有权有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，阅和借阅。本人授权逝洹垄三太堂可以将学位部分内容编入有关数据库进行检索和传播，、缩印

2、或扫描等复制手段保存、汇编学位论文(保密的学位论文在解密后适用本授权书!)保留并向国允许论文被论文的全部可以采用影学位论文作者签名：旌珈谢签字日期：秒侈年乡月夕日导师签名：．姗戥签字日期：例，厂年罗月侈日浙江理工大学硕士学位论文蛋白酶体低活性对Nanog阳性肝癌干细胞“干性”维持的作用机制研究摘要肝癌是死亡率仅次于胃癌、肺癌的第三大常见恶性肿瘤，肝癌的发病率在全世界居恶性肿瘤的第五位，也是我国常见的恶性肿瘤之一。手术以及放化疗是目前治疗肿瘤的主要方法，但是病人生存率并不理想。肿瘤干细胞是一群具有自我更新和多向分化潜能的细胞，大量研究指出它的存在是肿瘤患者难治愈，预后差的关键。蛋

3、白酶体在多种干细胞中，均处与低活性状态，并与其维持细胞“干性”相关。本文利用以Nanog启动子驱动GFP表达的分选系统，分选得到GFppos以及GFpneg细胞，即NanogPos肝癌干细胞以及Nanogneg非肝癌干细胞。在此基础上，检测两群细胞中蛋白酶体活性水平，以及各种蛋白酶体组分的蛋白水平以及RNA水平，结果显示在NanogPos肝癌干细胞中蛋白酶体活性呈下调。由于蛋白酶体成熟蛋白POMP可作为提示蛋白酶体活性水平的指标，我们通过改变细胞内POMP的表达水平，检测细胞自我更新能力，包括细胞球形成能力以及克隆形成能力。进一步研究这种活性的变化对于细胞维持其“干性”的影响。

4、研究显示，下调POMP可导致细胞自我更新能力明显增强，而反之亦然。改变细胞内POMP表达水平后，Nanog的RNA表达水平以及蛋白水平也相应的发生改变，说明Nanog是蛋白酶体影响“干性”的下游靶基因。通过启动子荧光素酶报告系统，以及ChIP实验发现，蛋白酶体活性影响Nanog启动子的活性，进一步的研究发现Smad3以Smad3L磷酸化形式结合Nanog的启动子。蛋白酶体活性降低可提高Smad3L的表达水平，继而Smad3L促进Nanog的表达以维持细胞“干性”，即蛋白酶体低活性状态维持了Nanog阳性肝癌干细胞的“干性”。Smad3i可以有效地抑制Smad3以及Nanog的表

5、达，从而有效的抑制NanogPos细胞的自我更新能力。通过本文的研究可为将来临床上联合蛋白酶体抑制剂以及Smad3抑制剂特异性靶向肿瘤干细胞的治疗策略提供理论及实践基础。关键词：蛋白酶体成熟蛋白；肝癌干细胞；自我更新；Nanog；Smad3L浙江理工大学硕士学位论文蛋白酶体低活性对Nanog阳性肝癌干细胞“干性”维持的作用机制研究AbstractThelivercanceristhefifthmostcommonmalignancyintheworldandthethirdmostlethalcancerwhichmortalityisjustlessthanthecancer

6、sinstomachandlung．Theincidenceoflivercancerespeciallyhighinourcountry．Manykindsoftherapiesareutilizedinlivercancertreatment，includingSurgery，radiationandchemotherapy，butthesurvivalrateisyetunsatisfactory．Cancerstemcellsareasubpopulationofcellsthathaveself-renewalandmulti-directionaldifferent

7、iationproperties．Alargenumberofstudieshaveshownthatthecancerstemcellscontributetopoorprognosisandtherapyresistanceinmanyhumancancers．Havereportedthatproteasomeactivityislowinavarietyofstemcellsanditisrelatedtomaintainingcell’SsternnessInourresearch