肥大细胞参与lgr5+结直肠癌干细胞干性维持作用机制的初步探讨

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1、分类号学号学校代码密级等肀科在寧博士学位论文肥大细胞参与结直肠癌千细胞干性维持作用机制的初步探讨学位申请人：李桉树学科专业：外科学（普外）学位类别：专业型博士学位指导教师：王国斌教授答辩日期：年月AdissertationsubmittedtoHuazhongUniversityofScienceandTechnologyfortheDegreeofDoctorofMedicineMastcellsinvolvedinmaintainingthesternnessofIgr5+colonrectalcancerstemcellsandtheinvestigationofitsm

2、echanismD.Candidate:LiAnshuMajorGeneralSurgerySupervisor:Prof.WangGuobinHuazhongUniversityofScience&TechnologyWuhan430074,P.R.ChinaMay,2015华中科技大学同济医学院■■■褊■—：—独创性声明本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承

3、担本声明引起的一切法律后果。学位论文作者签名：日期年月学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密口。请在以上方框内打学位论文作者签名指导教师签名：日期年月日期：年月曰华中科技大学博士学位论文目录主要申紋缩躺对照表要文第一部分、在人类结直肠癌中的表达及临床意义⋯引材辟方去实雖果参考文

4、第二部分肥大细胞参与小雖肠癌干细胞持的研究弓材船方法果第三部分肥大细胞参与小鼠结肠炎癌模型中通路活化的研究华中科技大学博士学位论文弓材法实雖果参考文献全胃述§谢本课题受以下基金赞助：国家自然科学基金项目（编号：国家卫计委公益性行业专项（编号：湖北省科技支撑计划项目（编号：华中科技大学博士学位论文主要中英文縮略词对照表英文缩写英文全称中文全称细胞原癌基因结直肠癌二甲基亚砜乙二胺四乙酸二钠胎牛血清流式细胞技术甘油醛磷酸脱氢酶淋巴增强因子亮氨酸重复序列蛋白偶联受体光吸收度聚丙烯酷胺凝胶电泳磷酸缓冲液聚合酶链反应苯甲基磺酰氟聚偏二氟乙烯实时定量聚合酶链反应核糖核酸凝血酶敏感蛋白型重复序

5、列逆转录干细胞因子十二烷基硫酸钠三羟甲基氨基甲烷缓冲液细胞因子免疫印记华中科技大学博士学位论文肥棚胞参与难挪癌干细胞持作用机制的初步探讨中文摘要第一部分、、在人类结直肠癌中的表达及临床意义目的探讨人类结直肠癌组织中浸润型肥大细胞的表达情况，及其分泌的蛋白的表达与临床病理资料之间的关系。方法：年月年月，收集结直肠癌、癌周组织及手术近端切缘组织标本例，釆用免疫组织化学染色方法、双标免疫荧光方法和免疫蛋白印迹法检测各组织中和蛋白的表达，实时定量聚合酶链反应检测和的的表达。比较肥大细胞及其表达的与临床病理特征。结果：免疫组化检测发现在结直肠癌组织、癌周组织的阳性表达率分别为和，高于手术

6、近端切缘组织的，差异有统计学意义在癌周组织、手术近端切缘组织的阳性表达率分别为和高丁癌组织，差异有统计学意义（；癌周组织中的强阳性（表达强度与肿瘤分化程度及淋巴结转移分站情况呈正相关（值分别为和，而的强阳性（表达与肿瘤分化程度、淋巴转移、浸润深度和分期无明显相关性（值分别为、、、；实时定量聚合酶链反应和免疫蛋白印迹检测结直肠癌组织中的相对表达也明显高于癌周组织，癌周组织中的相对表达量明显高于肿瘤及近端切缘组织。结论人类结直肠癌局部环境中的具有浸润型肥大细胞，同时也表达，癌周组织局部环境中浸润型肥大细胞的密度与肿瘤分化程度及淋巴结转移分站呈正相关；人类结直肠癌组织中的受体呈明显高

7、表达状态。因此，浸润型肥大细胞分泌的可能与结直肠癌干细胞表面受体结合共同维持结直肠癌干细胞突变的稳走性及部分恶性也物学效应。【关键词】；；结直肠癌华中科技大学博士学位论文第二部分肥大细胞参与小鼠结肠癌干细胞干性维持的研究目的：浸润型肥大细胞介导的在小鼠结直肠癌干细胞系中影响信号通道的机制研究方法：培养小鼠浸润型肥大细胞系，小鼠结肠癌细胞系将普通细胞进行无血清悬浮培养获得球细胞：提取细胞进行干性检测；将细胞系通过不同浓度进行刺激悬浮培养，提取细胞蛋白质检测等的蛋白的表达情况；将球细胞与细胞进行