骨桥蛋白在维持肝癌细胞干性特征中的作用及其机制研究

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1、万方数据分类号论文编号密级j厣交通戈訾博士学位论文骨桥蛋白在维持肝癌细胞干性特征中的作用及其机制研究FunctionandMechanismofOPNinMaintainingStemnessCharacteristicsofHepatocellularCarcinoma研究生姓名：曹磊学号：0097109035指导教师：学科、专业：学位类型：答辩日期：张雁云教授二。一三年四月万方数据上海交通大学2013届博士学位论文骨桥蛋白在维持肝癌细胞干性特征中的作用及其机制研究姓名：学号：系所：专业：研究方向：资助基金：学位级别：导师：曹磊0097109035医学院免疫学肿

2、瘤机制研究“973”项目博士张雁云教授二。一三年四月万方数据ThesisforDoctorDegree，ShanghaiJiaoTongUniversityFunctionandMechanismofOPNinMaintainingStemnessCharacteristicsofHepatocellularCarcinomaPh．DCandidate：LeiCaoMajor：ImmunologyResearchField：MechanismofTumorProgressionCollege：SchoolofMedicineAdvisor：Yan—yunZhang

3、Apr．2013万方数据上海交通大学学位论文原创性声明学位论文原创性说明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。⋯一张牛磊日期：J哆年朋多日万方数据上海交通大学博士学位论文上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查

4、阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密口，在一年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口。(请在以上方框内打“4”)指导剥磁轹苛形一骼日名．鳌胡秘◆仁年刘们位瓤万方数据上海交通大学博士学位论文摘要肿瘤干细胞(cancerstemcell，CSC)是一群处于静息或休眠状态、具有高度自我更新和分化成子代肿瘤细胞的能力，并且能够抵抗化疗药杀伤的肿瘤细胞。肿瘤干细胞具有正常组织干细胞的干性特征，同时具有很强的成瘤能力。肿瘤干细胞理论能很好的解释肿瘤的异质性，目前多

5、种实体瘤包括肝癌中都发现有肿瘤干细胞的存在。骨桥蛋白(osteopontin，OPN)是一种重要的炎症因子与癌基因，在多种肿瘤包括肝细胞肝癌中高表达。我们前期的结果发现OPN可以通过抑制凋亡来促进肿瘤生长和转移。但是OPN对肿瘤细胞的干性调控作用尚没有文献报道。侧群细胞(sidepopulation，SP)被认为是肿瘤干细胞样的一群细胞。我们首先检测了四株肝癌细胞系SP的比例以及OPN的表达情况，发现SP比例与OPN表达水平呈正相关；同时在分选的SP细胞群中，也发现OPN在SP细胞群中高表达，而在主群细胞(majorpopulation，MP)中低表达。静息细胞或

6、称休眠细胞(quiescentcell)是一群正常情况下处于静息状态但在适当的情况下能够迅速分化增殖的一类细胞，被认为是一群潜在的干细胞。除此之外，悬浮培养的细胞球以及对化疗药抵抗的细胞都被认为是一群富集了干性的细胞群。通过免疫荧光、RealTimePCR以及WesternBlot检测我们发现OPN在PKH26以及BrdU标记静息细胞中，在细胞球中以及在化疗药抵抗的细胞中都高表达。肝癌细胞系中干扰OPN的表达在体外能够减少细胞球的形成，降低SP细胞比例，增加肝癌细胞对化疗药的敏感性以及减少干性相关基因的表达，而在体内能使免疫缺陷小鼠有限稀释成瘤率明显减少。相反的，

7、在OPN低表达的细胞系中正转OPN能增加干性特性如促进细胞球的产生等。细胞外的OPN对肝癌细胞系的干性维持起着重要作用，抗OPN抗体的加入能明显抑制细胞球的形成和SP群细胞比例。在作用机制上，OPN与细胞表面的integrinave3结合，激活转录因子NF．rd3，促进NF．1(B与HIFla的启动子区结合并激活HIFIa的转录，最后通过HIFIa本身或是下游基因Bmil完成对肿瘤干性的调控。我们检测并统计了125例肝癌组织的OPN表达，发现OPN表达的高低与肝癌病人的预后呈明显负相关，而且OPN与HIFla有明显的表达相关性，进一步证实了OPN通过HIFlet调

8、节肿瘤细胞