caveolin-1在香烟烟雾提取物诱导气道粘蛋白muc5ac高分泌中的作用

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1、中图分类号UDC博士学位论文学校代码密级Caveolin．1在香烟烟雾提取物诱导气道粘蛋白MUC5AC高分泌中的作用Theeffectofcaveolin-—1oncigarettesmokeextract--inducedMUC5AChypersecretion作者姓名：俞巧学科专业：l临床医学研究方向：内科学学院(系、所)：湘雅医院指导教师：陈琼教授论文答辩日期丝堡：翌鼻丝答辩委员会主席中南大学二O一三年五月闺刈原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外

2、，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：企查日期：业嘞丝日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。

3、日膨垃午￡咩日八年制博士学位论文中文摘要Caveolin．1在香烟烟雾提取物诱导气道粘蛋白MUC5AC高分泌中的作用摘要背景：气道粘液高分泌是许多慢性气道炎症疾病加重与进展的重要因素，MUC5AC是气道中最重要分泌型粘蛋白。最近实验显示EGFR-P13K细胞信号通路在脂多糖或中性粒细胞弹性蛋白酶诱导气道上皮细胞MUC5AC基因高表达中有重要作用。吸烟是慢性阻塞性肺疾病(chronicobstructivepulmonarydiseases，COPD)的一个重要病因，其中许多物质造成气道高分泌。我们推测香烟烟雾引起气道上皮粘液高分泌很可能同样与EG

4、FR-P13K信号通路密切相关。小窝蛋白．1(caveolin．1)是一个胞膜上小窝结构的标志蛋白，广泛表达于多种细胞，作为多种细胞信号的枢纽，参与细胞信号转导与调控，介导细胞生理或病理过程。近年，Caveolin．1被认为是炎症反应中重要调节分子，参与气道炎症发生、发展。而目前尚未见caveolin．1在气道粘液高分泌中作用的报道。我们期望通过本研究探讨香烟烟雾提取物(cigarettesmokeextract，CSE)诱导气道粘蛋白MUC5AC高分泌的机制，理解caveolin-1在其中的作用。目的：探讨CSE诱导气道粘蛋白MUC5AC高分泌

5、的发生机制；了解caveolin．1对气道粘蛋白MUC5AC高分泌过程的调控作用；阐明II八年制博士学位论文中文摘要caveolin-1参与气道粘蛋ESMUC5AC高分泌调控的可能分子机制。方法：(1)利用CSE束IJ激气道上皮细胞HBEl6构建气道粘液高分泌体外模型。观察CSE束IJ激后细胞活性抑制情况，RT．PCR检测MUC5ACmRNA的表达，ELISA法检测MUCSAC蛋白分泌，Westernblotting检测EGFR，EGFR磷酸化，Akt，Akt磷酸化蛋白的表达情况。采用EGFR抑制剂(AGl478)和P13K抑制剂(LY29400

6、2)预处理气道上皮细胞HBEl6，观察其对CSE诱导的MUC5AC，EGFR，EGFR磷酸化，Akt，Akt磷酸化表达的影响。(2)分别转染caveolin-1过表达质粒至气道上皮细胞船E16和用小窝抑制剂甲基p环糊精(Methyl．13-cyclodextrin，M13CD)预处理气道上皮细胞30min，再以CSE刺激气道上皮细胞HBEl6，RT．PCR检钡IJMUC5ACmRNA的表达，ELISA法检、狈fJMUC5AC蛋白分泌，Westernblotting检钡lJcaveolin．1，EGFR，EGFR磷酸化，Akt，Akt磷酸化蛋白的表

7、达。用AGl478和LY294002特异性阻断EGFR和P13K后，再检测上述指标的表达。结果：(1)成功构建气道粘液高分泌体外模型；10％CSE处理气道上皮细胞24h后MUC5ACmRNA及蛋白表达明显增加，EGFR磷酸化及Akt磷酸化增加；AGl478预处理后明显降{氐CSE诱导气道上皮细胞中MUC5ACmRNA及蛋白表达、EGFR磷酸化及Akt磷酸化水平；LY294002预处理后，CSE诱导的MUC5ACmRNA及蛋白表达和AktIIl八年制博士学位论文中文摘要磷酸化下降，但EGFR磷酸化无改变。(2)气道上皮细胞t-[BEl6转染cave

8、olin-1过表达质粒，能够上调CSE诱导的MUC5ACmRNA及蛋白表达和EG．FR磷酸化及Akt磷酸化水平；采用M]]CD预处理后，