反相高效液相色谱法测定犬血浆中左氧氟沙星浓度及其犬体内药代动力学

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1、维普资讯http://www.cqvip.com·669·中国临床药理学与治疗学◇研究原著◇中国药理学会主办CN34-1206／R．ISSN1009-2501http：／／www．DixlgOlilfla．r2O04Jun；9(6)：669—672反相高效液相色谱法测定犬血浆中左氧氟沙星浓度及其犬体内药代动力学姜希凌，孙建国，王广基，李昊，李鹏，何卉中国药科大学药代动力学重点实验室，南京210009，江苏摘要目的：建立测定犬体内左氧氟沙星血药浓度其抗菌活性为其D一型对映体的8～12倍，是消旋体的反相高效液相色谱法，并测定其

2、犬体内药代动力的2倍，而不良反应较消旋体低，故在临床中广泛使学。方法：以环丙沙星为内标，采用10％高氯酸为用⋯。文献报道中检测喹诺酮类抗菌药一般都使用沉淀剂处理犬血浆样品，色谱柱为DIKMADiamon．HPLC紫外检测法l2及微生物杯碟法]。微生物sil1C5111，150nRn×4、6nRn，流动相为甲醇一PBS．杯碟法检测出的结果是药物具有抗菌活性的代谢物三乙胺一异丙醇(33：67：0．14：0．4，用磷酸调pH之和，不能得到确切的结果，而HPLC紫外检测法则为3．0)，流速1．2ml·min～，柱温20cc，荧光检

3、测由于血浆杂质干扰太多而导致检测灵敏度低，本文(=295am，入=440nrn)。结果：血药浓度线性范采用甲醇、PBS磷酸盐缓冲液、三乙胺与异丙醇作为围0．25～50mg·L(r=0．9998)，最低检测限浓度流动相测定犬血浆中左氧氟沙星浓度，样品只需使为0．02nag·L一(S／N>3)，绝对回收率为83．0％～用高氯酸沉淀蛋白后直接进样，荧光检测，简便、灵85．6％(n=5)，方法回收率为92．10％～106．77％敏，同时，本方法也适用于人血浆中左氧氟沙星浓度(n=5)，日内和日问RSD分别为1．3％～4．0％和的测

4、定。1．8％8．2％(n=5)。结论：本方法简便、灵敏、精1材料与方法密度高，重现性好，适用于左氧氟沙星犬体内药代动力学研究及生物等效性研究。1．1仪器日本岛津LC．10Avp高效液相色谱仪关键词左氧氟沙星；反相高效液相；血药浓度；药(含岛津LC．10Avp泵，DGU．12A在线真空脱气机，代动力学SIL．10ADvp恒温自动进样器，CTO．10ASvp柱温箱，RF．10&-d荧光检测器各1台)。HS色谱数据工作站中图分类号：R969．1v4、0+forWindows95，Milli．QGradientA10超纯水器文献标

5、识码：A(MilliporeInc．USA)，SORVALL低温高速离心机文章编号：1009．2501(2oo4)o6．0669．04(SORVALLCo．USA)。1．2药品与试剂盐酸左氧氟沙星(1evofloxacin左氧氟沙星(1evofloxacin)为13本第一制药株式hydrochloride)对照品(含量>99％)由江苏省豪森药会社开发的第三代喹诺酮类药物，为氧氟沙星业公司提供，内标盐酸环丙沙星(cipmfloxacinhydro—(ofloxacin)的光学活性．型异构体[S(．)-ofloxacin]，c

6、hloIide)(含量>99％)由江苏省药检所提供，左氧氟沙星制剂由某制药厂提供。试验用水均为Milli．Q2004431．26收稿2OO4-O4．12修回超纯水仪制备，甲醇为HPLC级，美国TEDIA公司产江苏省药代动力学重点实验室资助项目(NoBM2001201)品，实验中所用其它试剂均为国产分析纯。姜希凌，李昊，硕士研究生。1．3色谱条件色谱柱：DIKMADiamonsilTMC。8色谱王广基，通讯作者，男，博士，教授，博士生导师，主要研究方向：药物代谢动力学。柱(5,tun，150nRn×4．6nRn)。流动相：P

7、BS一甲醇一Tel：025-8327l544E—mail：萄wang@cpu．edu．cn异丙醇一三乙胺(67：33：0．4：0．14，用磷酸调pHl李鹏。何卉，中国药科大学2003届本科毕业生。为3．0)；PBS磷酸盐缓冲液的组成：氯化钾0．2g，磷维普资讯http://www.cqvip.com·670·Chi——nJClinPharmacolTher2004Jun；9(6)酸二氢钾0．2g，氯化纳8．0g，十二水磷酸氢二钠将高、中、低3个浓度对照品血浆的峰面积与相应浓2．08g溶于1000ml超纯水中。流速度对照品溶

8、液直接进样所得的峰面积进行比较计算1．20ml·min～，柱温20℃；荧光检测波长：=左氧氟沙星在血浆中的绝对回收率。在测定首日内295nln，=440rim；进样量20l。各浓度测定5次，计算日内精密度，然后连续测定1．4溶液配制精密称取盐酸左氧氟沙星对照品5d，每日测定1次，计算日间精密度，结果见表