抗炭疽pa15单克隆抗体的制备、鉴定及免疫学检测方法的建立

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1、分类号：R3密级：单位代码：学号：1031220101069南京医科六掌硕士学位论文题目：研究生：指导教师：圈熬拯墨拯理熬拯研究方向：拉篮王猩学完成时间：三Q二婴生三旦南京医科大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：矗I弧、导师签名：、／件冬纱即日期：硼、

2、￥年6月)日日期：矽／缉易月巧日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于(请在以下相应方框内打“4”)：1、保密口，在年解密后适用本授权书。2、不保密口。愀名：商l磷弋导师签名：-亍{b1日期：伊-P年b月)日日期：舢f节年l'月5日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．1ABSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3—1厶—jL日U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·6第一部分炭疽杆菌保护性抗原的表达、纯化及鉴定材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．9结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l5讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．19第二部分抗

4、PA·5单克隆抗体的制备、鉴定及免疫学检测方法的建立材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．38小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．41参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47附录

5、1：缩略语⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯60附录2：攻读学位期间发表文章⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．61致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．62南京医科大学硕士学位论文抗炭疽PAl5单克隆抗体的制备、鉴定及免疫学检测方法的建立中文摘要炭疽病(anthrax)是由炭疽芽胞杆菌(Bacillusanthracis)引起的急性人兽共患传染病，人群普遍易感。由于其高度致病性、其芽胞在恶劣环境中有较强的生存能力以及可通过气溶胶途径感染等特点，长期以

6、来被认为是首选的生物战剂，并用于生物恐怖袭击。炭疽病在发病的早期，没有明显的特异性症状，诊断较为困难。目前治疗的主要手段为对症处理和尽早地使用大剂量青霉素用于杀灭体内的细菌，但青霉素对炭疽杆菌产生的外毒素并无作用。炭疽外毒素是致病的主要因素，治疗炭疽的关键是抑制炭疽外毒素的作用。炭疽外毒素由三种蛋白组成：保护性抗原(protectiveantigen，PA)、致死因子(1ethalfactor，LF)和水肿因子(edemafactor，EF)。LF与PA结合，构成致死毒素(1ethaltoxin，LeTx)；EF与P

7、A结合，构成水肿毒素(edematoxin，EdTx)。PA是炭疽杆菌最主要的免疫原，能诱导机体产生保护性免疫。目前炭疽外毒素的致病作用机制已经认识得比较清楚，PA在炭疽致病作用中起核心作用，从而使得它成为一个很好的诊断和治疗靶点。本课题利用DNA重组技术制备具有天然活性的可溶性PA63，利用杂交瘤技术制备特异性抗PAl5单克隆抗体，并建立了抗原捕获ELISA检测方法，有望用于炭疽临床样本的免疫学诊断。研究目的：1．表达pColdII．PA63和pColdII—PAl5重组质粒，纯化可溶性PA63和PAl5蛋白，并对

8、重组蛋白进行鉴定。2．用可溶性的PA63免疫小鼠，利用杂交瘤技术，制备、筛选、鉴定抗PAl5单克隆抗体。3．初步建立抗原捕获ELISA检测方法，以此来检测感染炭疽患者血清中的保南京医科大学硕士学位论文护性抗原，用于炭疽病的早期诊断。研究方法：1．将合成的PA63基因*IPAl5基因分别插入pColdII表达载体，转化大肠杆菌诱导表达，采用His