两种微型绿藻营养生理及原生质体制备与杂交育种的研究

《两种微型绿藻营养生理及原生质体制备与杂交育种的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、暨南大学硕士学位论文两种微型绿藻营养生理及原生质体制备与杂交育种的研究姓名：陈波申请学位级别：硕士专业：水生生物学指导教师：齐雨藻20000101两种微型绿藻营养生理及原生质体制备与杂交育种的研究摘要雨生血球藻(Heamatococcuspluvialis)与普通小球藻(Chlorellavulgaris)均为单细胞、光能自养的淡水绿藻。由于其具有较高的营养价值及高光能效应，近年来越来越受到人们的重视。从应用研究逐渐转向商业生产，同时藻种也需要进行必要的改进。以细胞融合为杂交育种手段，不失为一种简便、直接、快速的单细胞微藻育种方法。雨生血球藻与普通小球藻在营养生理上有着较大的差异。雨生

2、血球藻不能够利用以尿素为氮源或者以醋酸盐为碳源的培养基；普通小球藻则可以充分地利用上述两种营养成分，并且在高盐浓度的培养基中迅速地生长。本文采用酶法制备雨生血球藻和普通小球藻的原生质体。根据细胞壁的差异，分别采用不同的酶及处理方法。雨生血球藻的原生质体制备选用了O．06％蛋白酶K，pH7．8，35℃处理1小时，最高可得到48．70％的原生质体形成率，以及在以聚乙二醇(PEG6000)为渗透压调节剂的再生平板上，原生质体再生率最高可达到60．32％。针对小球藻细胞壁结构的特殊性和多样性，进行了一系列的酶解条件实验。最后确定的理想酶解条件为：在2DG(2-脱氧-d．葡萄糖)预培养24小时后

3、，用2％纤维素酶，2％果胶酶，2％半纤维素酶，pH5．5，30℃处理14小时。在上述的条件下，可以得到最高37．14％的原生质体形成率，以及在以PEG6000为渗透压调节剂的再生平板上最高56．67％的原生质体再生奎。原生质体的融合，结合了PEG法和高钙高pH法：混合两个亲本的原生质体后，加入20％PEG6000，30℃处理30分钟，然后分两次加入高钙高pH的融合洗涤液(处理时间分别为10分钟，20分钟)。融合处理后的细胞接种至以PEG6000为渗透压调节剂的再生平板。由于两个亲本细胞在形态上较大的差异，融合后对再生平板上长出的藻落细胞进行显微镜观察，挑选出形态与普通小球藻类似，但个体

4、较普通小球藻大的融合子细胞。扩大培养后，通过对脂肪酸的定性定量分析，进一步验证了融合子。关键词：雨生血球藻，普通小球藻，原生质体，融合StudiesOnNutritionalPhysiology,ProtoplastPreparationAndHybridizationBreedingofTwoMicroalgaeAbstractBothHaematococcuspluvialisandChlorellavulgarisaresinglecell，opticalenergyautotrophic．舶shwatermicroalgaebelongstoChlorophyta．Becaus

5、eoftheirhi曲valueofnutrientandphotosynthesiscapability,theytwoarepayedmoreandmoreattentionto．Fromapplicationresearchtocommercialproduction，thealgalstrainneedimproverelatively．Cellfusionhasbeenprovedasimple，directandrapidhybridizationmethodofsingle—cellalgaebreeding．There’SmuchdifferentbetweenH．pl

6、uvialisandC．vulgarisinnutritionalphysiology．H．．pluvialiscouldn’tgrowinthemediumcontainedureaasthenitrogensourceoracetateasthecarbonsource，whileC,vulgariscouldgrowverywellinsuchmedium．Thepreparationoftwokindsofprotoplastswerecarriedthroughwithenzymaticmethod．Accordingtothedifferenceofthecellwallc

7、onstitution，weuseddifferentenzymeswereusedtogettheprotoplasts．AftertheH．pluvialiscellsweretreatedwithO．06％proteinaseRpH7．8riffs—HCI，35"Cfor1hour,wecouldgetthehighestprotoplastformingrateof48．70％andhighestprotoplastregenerati