原生质体制备.ppt

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1、原生质体的制备细胞生物学实验六目的要求掌握植物原生质体的分离制备技术,观察原生质体的形态。实验原理分离原生质体常采用酶解法。其原理是根据由纤维素酶、果胶酶和半纤维素酶配制而成的溶液对细胞壁成分的降解作用,而使原生质体释放出来。原生质体的产率和活力与材料来源、生理状态、酶液的组成、以及原生质体收集方法有关。酶液通常需要保持较高的渗透压,以使原生质体在分离前细胞处于质壁分离状态,分离后不致膨胀破裂。渗透剂常用甘露醇,山梨醇,葡萄糖或蔗糖。酶液中还应含一定量的钙离子,来稳定原生质膜。游离出来的原生质体可用过筛法收集。实验用品一、材料菠菜二、器材显微

2、镜,擦镜纸,剪子,镊子,小平皿,吸管四支,直式漏斗,300目尼龙网,10ml离心管,载玻片,盖玻片。三、试剂1.洗涤液:甘露醇0.6M;CaCl2·2H2O8mMNaH2PO4·H2O2Mm,pH5.62.酶液:实验方法1、酶液的制备2、材料准备3、酶解4、洗涤观察纯化后的原生质体胚性愈伤组织亦是原生质体分离的主要材料思考题1、何为原生质体2、分离得到的原生质体可有哪些用途?3、为什么酶解材料时,酶解液要保持较高的渗透压?

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