苦豆子总生物碱冻干粉针制备和其抑瘤作用考察

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1、苦豆子总生物碱冻干粉针制备和其抑瘤作用考察［摘要］目的：考察苦豆子总生物碱注射用冻干粉针的成型工艺并观察其对小鼠肝癌H22移植性肿瘤的抑瘤作用。方法：以颜色、澄明度、水溶性及成形性为指标，通过单因素试验筛选充填剂的种类和用量，确定苦豆子总生物碱注射用冻干粉针的最佳处方；选取药液质量浓度及pH为考察因素，采用单因素试验优选苦豆子总生物碱注射用冻干粉针的制备工艺，测定最低共熔点并绘制冷冻干燥曲线。通过在小鼠右腋皮下无菌接种小鼠肝癌H22腹水瘤瘤株，观察苦豆子总生物碱注射用冻干粉针对该移植性肿瘤的抑瘤作用。结果：选取80g•L-1甘露醇为填充剂，冻干前药液中苦豆

2、子总生物碱质量浓度为25g・L-l,pH6.5〜7.5时，冻干效果最好，复溶速度快。苦豆子总碱注射用冻干粉针高(120mg•kg-1),中(60mg・kgT)剂量组对小鼠肝癌H22移植性肿瘤的平均抑瘤率分别为56.08%,35.49%o结论：苦豆子总生物碱冻干粉针制备工艺合理且重复性好，质量稳定，对小鼠肝癌H22移植性肿瘤具有明显的抑瘤作用并呈明显量效关系。［关键词］苦豆子总生物碱冻干粉针剂；制备工艺；肝癌；抑瘤率苦豆子为民间常用药，广泛分布于河北、河南、山西等地，具有清热解毒、抗菌消炎的作用［1］。目前学者对苦豆子总生物碱的研究较多，包括苦参碱、氧化苦参

3、碱、氧化槐果碱［2-3］等，发现苦豆子总生物碱具有抗炎、抗菌、免疫、抗肿瘤等作用［4-8］o本实验拟制备苦豆子总生物碱注射用冻干粉针，并考察其对小鼠肝癌移植性肿瘤的抑制作用。1材料DLG-6型真空冷冻干燥机（上海市离心机械研究所有限公司），JJ-200型精密电子天平（美国双杰兄弟有限公司），PHB-8型笔式pH计（上海康宁电光技术有限公司）。苦豆子总生物碱提取物（盐池县都顺生物化工有限公司，质量分数95%,批号01210054）,氧化苦参碱对照品（中国食品药品检定研究院，批号0780-200004）,生理盐水（石家庄四药有限公司），小鼠肝癌H22腹水瘤瘤株

4、（中国中医科学院中药研究所肿瘤组提供），一水葡萄糖、D-甘露醇、乳糖、密丙基-B-环糊精（HP-B-CD）均购自北京凤礼精求商贸有限责任公司，水为自制注射用水，其他试剂均为分析纯。2方法与结果2.1充填剂种类及用量考察［9］以冻干针剂的外观、色泽和复溶性为考察指标，选取甘露醇、一水葡萄糖、氯化钠、乳糖、HP-P-CD为充填剂，分别考察不同辅料不同加入量(40,60,80,100,120g-L-1)对冻干成型的效果，共26个处方(1个处方为冻干原液，其他25个为加辅料处方)，以确定充填剂的种类和用量。结果发现原液方、一水葡萄糖的5个配方、乳糖的5个配方及氯化

5、钠2个低质量浓度配方均在冻干过程出现发泡、萎缩现象;氯化钠3个高质量浓度配方和HP-B-CD的3个配方(40,60,120g・LT)成型较差；HP-B-CD的另外2个配方成型一般，且冻干样品颜色不均一、且有裂纹；低质量浓度甘露醇的2个配方成型一般，甘露醇(80,100g・L-1)的2个配方成型较好、外观光洁、颜色均一、产品饱满呈团块状，120g・L-1甘露醇冻干产品有花斑，颜色不均一。2.2药液质量浓度的选择配制苦豆子总生物碱质量浓度分别为25,50,80,100g•L-1的冻干前药液，加入不同质量浓度的甘露醇作为充填剂，进行冻干，观察成品性状，见表lo结

6、果显示药液中总生物碱质量浓度为25g•L-1时冻干效果最好；甘露醇质量浓度为80,100g・L-l时，冻干液的体积小，厚度适宜，有利于冷冻干燥过程的进行，且冻干样品在外观、水溶性及澄明度等方面最好，综合考虑，选择甘露醇质量浓度80g•L-lo2.3不同pH对冻干质量影响的考察取苦豆子总生物碱原液(pH9.5),用磷酸调pH5.0,5.5,6.0,6.5,7.0,7.5,&0,分别取不同pH液体及原液，加入适量甘露醇进行冻干，考察冻干质量的变化情况。同时以氧化苦参碱为对照品，供试品及对照品均用适量甲醇超声溶解，釆用酸性染料比色法，精密吸取对照品溶液及供试品溶

7、液20uL,于80°C水浴蒸干，精密移取pH7.6的澳麝香草酚蓝缓冲溶液4mL,三氯甲烷6mL,振摇2min,加至分液漏斗中，放置2h,取下层，于420nm处比色[10],外标两点法测定，以氧化苦参碱计算总生物碱含量，结果见表2,冻干前后pH无明显变化，苦豆子总生物碱含量无显著性差异，溶液颜色随pH的增加而加深，故选择与人体血液相近的pH6.5〜7.5为优选pHo2.4最低共熔点的测定冷冻干燥时，在冻结与升华过程中，制品的温度超过了最低共熔点，则部分溶质或全部溶质将处于液相中，冰晶体的升华被液体浓缩蒸发所取代，干燥后制品将发生萎缩，溶解速度亦降低，因此最低

8、共熔点是获得最佳冻干效果的临界温度。按最佳处方配制溶液，对苦豆子总