袁氏生脉成骨片含药血清诱导骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的实验研究

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2、采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签文导师签名一f睥硐谚中文摘要目的：观察袁氏生脉成骨片含药血清促进骨髓问充质干细胞增殖及诱导向成骨细胞分化的影响，以及对激素引起的骨髓问充质干细胞增殖抑制的影响，为袁氏生脉成骨片治疗股骨头缺血性坏死提供理论依据。方法：取成年SD大鼠给予袁氏生脉成骨片药液连续灌胃4天，采血、分离制备含药血清；采用改良密度梯度法联合贴壁法提取SD大鼠骨髓间充质干细胞，经体外培养纯化扩增培养至第3代后，随机分为4组：空白组(含DMEM液90ml、FBSloml的L-DMEM培养基)、地塞米松组(在空白组基础上添

3、加10’7mol／L浓度地塞米松)、中药含药血清组(在空白组基础上添加浓度为1096的生脉成骨片含药血清)、中药含药血清干预组(在中药组基础上添加地塞米松，使其终浓度为10。mmol／L)，添加诱导液24小时后连续5天分别采用MTT法测量各组oD值，绘制细胞增殖曲线，分析各组对骨髓间充质干细胞增殖的影响；取第3代BMSCs细胞随机分为2组：中药含药血清组、传统成骨诱导组，分别诱导后，生物倒置显微镜下观察碱性磷酸酶染色及茜素红染色后细胞的钙化情况。结果：采用改良的密度梯度离心法联合贴壁筛选法能简便、经济、有效地获得大鼠骨髓间充质干细胞，并进行体外扩增及纯化培养。分析各组0D值，与

4、空白组对比，袁氏生脉成骨片含药血清组0D值明显升高，有显著性差异(p，o．05)，显示袁氏生脉成骨片含药血清能促进骨髓间充质干细胞增殖；地塞米松组OD值在前3天逐渐上升，第3天开始出现下降，第5天明显降低，与空白对照组相比，有显著性差异(艮O．05)，显示地塞米松能抑制细胞增殖，加快细胞凋亡；中药含药血清干预组oD值在前3天快速上升，第4天趋于平稳，第5天开始出现下降，与地塞米松组相比，第l天无明显差异(p，0．05)，第2～5天有显著性差异(P

5、诱导后，生物倒置显微镜下观察骨髓问充质干细胞向成骨细胞形态变化，碱性磷酸酶染色及茜素红染色后呈阳性，显示袁氏生脉成骨片含药血清能诱导骨髓问充质干细胞向成骨细胞分化。结论：袁氏生脉成骨片含药血清能促进骨髓间充质干细胞增殖并诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化，能对抗地塞米松引起的细胞细胞增殖抑制，这可能是其治疗股骨头缺血性坏死的机理。生脉成骨片可作为良好的成骨细胞体外诱导剂，应用于组织工程学。关键词：中药；骨髓间充质干细胞；增殖；分化IlTheexperimentaIstudyofproIiferationanddifferentiationofBMSCstoosteobIasts

6、inducedbyserumcontainingYuanShiShengMaiOhengGutabIetsSpeciaIty：TOMTraumatologyAuthor：ZhengChuanghuaTutor：ZengYirongAbstractPurposeToobservetheeffectofYuanShiShengMaiChengGutabletsplayedindifferentialandproliferationofMSCtowardtoosteoblastaswellasMSCapoptosis，whichaimedtoprovidingtheoryeviden

7、ceforANFH．MethodsYuanShiShengMaiChengGutabletswereintragastricadministeredinadultSDratsfor4daysanddrugserumwascollectedandisolated．WeapplledmodifiedgradeddensitycentrifugationcombinedwithadherentscreenmethodstoextractSDratsMSCandexpandtothethirdgen