枸杞多糖含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞成骨

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1、第39卷5期宁夏医科大学学报2017年5月JournalofNingxiaMedicalUniversity·525·文章编号：1674-6309（2017）05-0525-05·论著·枸杞多糖含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导过程及Wnt信号通路的影响12341王雨，苗永霸，王银，张春，苗珍花（1.宁夏医科大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系，银川750004；2.宁夏贺兰县人民医院，银川750200；3.宁夏医科大学基础医学院神经生物学系，银川750004；4.宁夏医科大学颅脑疾病重点实验室，

2、银川750004）摘要：目的探讨枸杞多糖含药血清对诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化过程及Wnt信号通路的影响。方法4月龄SD雄性大鼠15只，随机分3组分别灌胃给予枸杞多糖（LBP）100、50mg·kg-1及蒸馏水，常规制备含药及空白血清；全骨髓培养法培养SD大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs），经纯化鉴定后，随机分为培养基组、诱导剂组、空白血清+诱导剂组（空白血清组）、LBP血清高、低剂量+诱导剂组（LBP血清高、低剂量组），进行成骨诱导；采用碱性磷酸酶（ALP）、茜素红染色检测BMSCs的成骨活性和矿化

3、能力，Westernblot检测β-catenin和wnt10b蛋白的表达情况。结果①与培养基组比较，诱导剂组、空白血清组、LBP血清高及低剂量组ALP、茜素红染色均为阳性，β-catenin、wnt10b表达均增加（P＜0.05或＜0.01）；②与诱导剂组比较，空白血清组、LBP血清低剂量组ALP沉淀、矿化结节无明显差别，LBP血清高剂量组增多；与诱导剂组比较，LBP血清高、低剂量组β-catenin、wnt10b表达增加（P均<0.05），空白血清组差异无统计学意义（P>0.05）；③与空白血清组比较，LB

4、P血清低剂量组的ALP沉淀、矿化结节无明显差异，LBP血清高剂量组增多，LBP血清高、低剂量组β-catenin、wnt10b表达增加（P均<0.05）。结论含LBP血清能增加经成骨诱导的BMSCs的成骨活性和矿化能力，这种作用可能与激活Wnt信号通路相关蛋白β-catenin和wnt10b蛋白的表达有关。关键词：枸杞多糖；骨髓间充质干细胞；成骨诱导；β-catenin；wnt10b中图分类号：R285.5文献标识码：ADOI：10.16050/j.cnki.issn1674-6309.2017.05.009骨

5、质疏松症（OP）是一种与年龄相关的常见可促进成骨细胞株的增殖和分化，但其治疗骨质多发退化性疾病，是人体机能自然衰退、成骨细疏松症的具体机制尚不明确。因此，本研究旨在胞和脂肪细胞转换失常的重要表现。OP患者通过观察含LBP血清影响BMSCs成骨分化过程的成骨细胞增殖能力降低，骨髓间充质干细胞中Wnt信号通路相关蛋白表达的变化，探讨Wnt（bonemesenchymalstemcell，BMSCs）向成骨细信号通路相关蛋白在含LBP血清影响BMSCs成[1]胞的分化减少。BMSCs是成骨细胞的前体细胞，骨分化过程中

6、的作用，为LBP治疗骨质疏松症作[2]能到达骨的靶标部位，参与骨的形成。Wnt信号用机制的进一步阐明提供实验依据。转导途径与成骨细胞的分化密切相关，其通路变1材料和方法[3-4]化会影响成骨细胞分化和成熟。枸杞（lycium1.1材料barbarum）是补肾益精的中药材，其主要成分为1.1.1试剂和仪器LBP购自宁夏沃福百瑞生枸杞多糖（lyciumbarbarumpolysaccharides，LBP），物食品公司（含量≥30%，批号64WFBR100501）；近年来，枸杞多糖在治疗OP方面引起了国内外原代细胞

7、培养试剂均购自美国GIBCO公司，小[5][6-7]学者的广泛关注。马锋等研究显示枸杞多糖牛血清购自GIBCO公司；间质干细胞成骨诱导分化培养基（成骨诱导剂）、茜素红均购自Cyagen收稿日期：2016-04-18公司；ALP钙钴法染色、全蛋白提取、SDS-PAGE基金项目：国家自然科学基金（81060034，81460220）；教育部“春晖凝胶配制试剂盒均购自KeyGENBioTECH公司；计划”（Z2011047）兔单克隆抗体β-catenin、兔多克隆抗体wnt10b、作者简介:王雨（1988-），女，

8、硕士研究生。鼠单克隆抗体GAPDH均购自Abcam公司；HRPE-mail：916070417@qq.com通信作者：苗珍花，硕士，教授，从事老年性疾病研究。标记的山羊抗小鼠IgGZB-2305、山羊抗兔IgGE-mail：miaozhenhua2003@163.comZB-2301均购自中杉金桥公司；ECL化学发光试·526·宁夏医科大学学报39卷剂盒购自THERMO公司。倒置相差显