tlr4myd88nf-κb信号通路介导外源性pacap对大鼠创伤性脑损伤的保护作用

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1、徐州医学院硕士学位论文TLR4/MyD88/NF--κB信号通路介导外源性PACAP对大鼠创伤性脑损伤的保护作用姓名：毛姗姗申请学位级别：硕士专业：麻醉学指导教师：张咏梅2012-03徐州医学院硕士学位论文对大鼠创伤性脑损伤的保护作用中文摘要目的观察垂体腺苷酸环化酶激活肽(PAG奸)对大鼠创伤性脑损伤(TBIl的神经保护作用，进而探讨其脑保护作用的免疫调节机制。方法应用改良的神经功能评分(mNss)、斜板实验、MorTis水迷宫(MwM)1实验检测大鼠感觉运动和认知功能的变化；应用脏染色检测形态学的变化；应用脑组织干／湿

2、重比检测脑组织水肿；应用Wrestemblot方法检测脑组织中Bax、Bd．2、T0n受体4(TU己4)以及11且4／{髓样分化蛋白88(MvD88)／核因子-k印paB(NF一1田)信号通路相关蛋白的变化；酶联免疫吸附(EuSA)检测信号通路下游细胞因子的变化；应用RT-PCR检测TU之4的基因表达；应用免疫荧光染色检测TLR4的表达及其与神经元标记物神经元核蛋白(卜kuN)，离子钙接头蛋白分子．1(Iba．1)、星形胶质细胞标记物胶质细胞纤维酸性蛋白(GFAP)的共表达。结果损伤侧皮层和海马的TI器4蛋白在TBI后1

3、2、18、24、48、72h表达明显增高，表达的高峰在11BI后24h，48h后TU℃4蛋白表达开始下降。侧脑室给予PAQ谨后能够明显改善TBI后的运动和认知功能障碍，改善病理组织学的改变，减轻神经元的凋亡和坏死，减轻脑水肿。同时，给予蚴Q姐能够抑制113I诱导的损伤侧皮层和海马的TUM蛋白的表达、TLR4下游信号蛋白MyD88、p—11cB、NF—KB的表达以及下游炎症细胞因子IL厂1B和TNF咀的生成。利用免疫荧光双标技术发现，神经元和小胶质细胞上的TLR4参与了创伤性脑损伤。除此之外，在体和离体实验中给予LPs诱导

4、Tu之4的过度表达，24h后侧脑室和BV2小胶质细胞培养液中给予PAcAP能够明显的抑制皮层、海马徐型堕兰堕壁主堂堡垒奎．一l——————————————————————一区以及小胶质细胞上的TLR4蛋白表达。结论PAcAP通过抑制神经元和小胶质细胞上的TLR4／MyD88／NF。KB信号通路抑制神经元的凋亡，改善创伤性脑损伤的预后，发挥神经保护作用。关键词PAQ廿；创伤性脑损伤；TI且4；MyD88；炎症性细胞因子徐州医学院硕士学位论文Exogenousadministrationof】9IACAPalleviates

5、traumaticbraininjuryinratsthroughamechanisminVolVingtheTLR4／MyD88／NF·KBpathwayAbstractObjectiVeTheaimofthepI-esentstudywastoinVestiga‘e虢ctofPituitaryadenylatecyclaSe—activatingpolyp印tidinratsandtheunde订yingmechanism．etheneuroprotectiVeeontfaumaticbraini11：juryMet

6、hodsnebatteryoftestsusedthemNsS(modifiedneur010西calsev嘶tyscores)system，theinclinedplalletask，aIldMorriswatermaze(MwM)wasusedtodetectedtraumainduccdneurolo酉c’motor，andco舶itivedeficits．Hematoxylin-eosin(m≯staininginordertoobservethebraininju珥BrainedemawasdetenIline

7、dusingthewet／drymethod．111eexpressionofTLR4，thedownstre锄si印alingmolecules，MyD88，p·I迎，andNF—KB．kvelsofinn锄matorymediatorswerequantifiedusingspecificEUSA1【itsforrats．1’LR4mRNAlevelswefedetemlinedbyRT-PCR．h11munofluorcSccnccstainingwasusedtodetecttheexpressionofTLR4

8、andofTUt4／neumnalnuclei(Neu哪，ionizedcalciumbindingadaptofmolecule-1(Iba-1)orTI且4／glialfibrillaryacidicprotein(G剧UP)double．1abel．ResultSInthisstudy，weinVestigat