念珠菌血症临床分析及病原基因芯片检测方法的研究

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1、万方数据复旦大学硕士学位论文後多大学硕士学位论文(专业学位)念珠菌血症临床分析及病原基因芯片检测方法的研究Candidemia：aclinicalsurveyandetiologicgenechipdetectionmethod院系：华山医院专业：内科学姓名：吴真指导教师：徐晓刚副主任医师导师组成员：黄海辉教授林东防副主任医师吴浞主管技师完成日期：2014年4月9日万方数据论文独创性声明本论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中除了特别加以标注和致谢的地方外，不包含其他人或其它机构已经发表或撰写过的研究成果。其他同志

2、对本研究的启发和所做的贡献均已在论文中作了明确的声明并表示，谢意。作者签名：塑日期：垫丛垒，9论文使用授权声明本人完全了解复旦大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存论文。保密的论文在解密后遵守此规定。作者签名：除内导师签名：、V’日期：加件牛、'万方数据兰兰三兰竺三兰竺兰兰!嬲型磐掣目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．3缩

3、略语⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．5前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6月lJ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯第一部分念珠菌血症临床分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一9研究对象与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9研究结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．16第二部分念珠菌血症病原基因芯片检测方法的建立⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18

4、材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．18实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．：⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．37第三部分念珠菌血症病原基因芯片检测方法的临床应用⋯⋯⋯⋯⋯39材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．39实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．39讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．46参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47综

5、述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．58万方数据复旦大学硕士学位论文念珠菌血症临床分析及病原基因芯片检测方法的研究中文摘要念珠菌血症是由念珠菌所致的血流感染。近年来，随着广谱抗菌药物的大量应用、免疫抑制人群的增加及有创诊断和治疗措施的广泛开展，其发病率日益增高，念珠菌已位居医院内所有血流感染病原菌的第4位。念珠菌血症主要由白念珠菌引起，然而近年来非白念珠菌比例逐渐升高，且近来发现部分非白念珠菌感染的致病菌具有对常规抗真菌药物的

6、天然耐受性，给临床治疗增加了更大的挑战。念珠菌血症预后受到多种因素影响，包括合理抗真菌治疗等。念珠菌血症的临床诊断比较困难，目前主要依赖于常规的分离培养方法，但其周期长且阳性率低，而真菌特异性抗原、抗体和代谢产物的血清学方法则存在敏感性及特异性低的缺陷。基因芯片技术(又名DNA芯片、DNA微阵列)是分子杂交基础上衍生的一项检测技术，可快速将致病菌鉴定种，能进行大批量基因检测，从而提高诊断效率。第一部分念珠菌血症临床分析本部分检索、收集2007年1月1日至2012年12月31日期间复旦大学附属华山医院所有血培养念珠菌阳性的住院患者病历资料，

7、回顾患者病历记录，整理性别、年龄、科室、基础疾病、致病菌种等基本资料，记录临床表现、治疗和转归。上述资料的统计结果显示，念珠茵血症病原菌种包括白念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌等，常见基础疾病包括实体肿瘤，胃肠道手术史、糖尿病等。留置深静脉导管、合理抗真菌治疗为影响预后的独立因素。第二部分念珠菌血症病原基因芯片检测方法的建立本部分建立了基因芯片技术鉴定临床常见念珠菌的分子生物学方法。PCR扩增临床常见念珠菌DNA所用的通用引物是根据真菌的2个18SrDNA保守区序列而设计，用此引物扩增念珠菌属DNA，并通过在PCR

8、引物上标记荧光基团，使扩增产物携带可被检测荧光信号。根据18SrDNA保守序列之间可变区设计合成了6种临床常见致病念珠菌(白念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠