人类锌指蛋白家族新基因znf540的克隆与功能研究

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1、湖南师范大学硕士学位论文人类锌指蛋白家族新基因ZNF540的克隆与功能研究姓名：向志明申请学位级别：硕士专业：发育生物学指导教师：李永青;吴秀山20060501摘要在心血管发病机理中，转录

2、山I子对基I大l农达调控起：秉婴的作用。确定对心血管系统中起作刖的训控整I大I对．丁．。J7解先天性心脏病和其它心血管疚病的发病机理非常必婴。Cys2／His2型锌指蛋白基因是一类很人的转录调控因子家族基劂，已发现j比多Cys2／His2型锌指蛋白参与丫心脏发育和心血管疾病。‘ZNF540就是本文作者在NilJjE物信息学办法筛选人类心脏发育候

3、选基因的过程中发现的一个人类新基l大J。ZNF540cDNA全长3335个碱基，ORF全长1983个碱基，编似⋯个长661个氨基酸残基的蛋白质。该蛋白包含一个KRAB结构域和I7个锌{匕结构域。Northern’结果姓乃÷ZNF540在6个月胚胎III行J“泛发达。ZNF540的COS．7业细胞定位于细胞核，转录活性分析农I!目，ZNF540．BD通过KRAB框抑制VP．16基因的转录活性，COS．7细胞一l

4、过表达ZNF540蛋白可以使MAPK信号途径的两个．-卜．游转录

5、大J子ELK．1和SRE的转录抑制活性。综合}=l前的研

6、究结果米石，ZNF540nJ‘能通过MAPK信号途径参与对细胞生命活动的调控过程。利川酵母双杂交实验筛选ZNF540的卡目丌竹：J1j蛋白，得剑96个监斑，测序发现其中一个为MVP。免疫≥￡沉淀实验和细胞信号报告基凶活性分析都初步证明了ZNF540和MVP可能存在相互作用。关键词：心脏发育：ZNF540；锌指蛋白；MAPK；转录凶子ABSTRACTTranscriptionfactorsplayallessentialroleincontrollinggeneexpressionduringcardiacandvascularpa

7、thogenesis．Identificationofregulatorygenesinthecardiovascularsystemisanecessarytowardanunderstandingofthepathogenesisofcongenitalheartdisease(CHD)andacquiredcardiovasculardiseases．TheCys2／His2typezincfingergenesarethesinglelargestclassoftranscriptionfactorsinthehumang

8、enomeandmanynumbersofthekriJpple—likezincfingergeneshavebeenfoundtobeinvolvedincardiacdevelopmentorcardiovasculardiseases．Inthepresentstudy,wereporttheidentificationandcharacterizationofanovelKRAB-containingzinc—fingerprotein，ZNF540，fromahumanembryonicheartcDNAlibrary

9、．ZNF540encodesaputativeproteinof661aminoacids．NorthernanalysisandNorthernblotindicatethatZNF540isexpressedinvarioustissuesatthesixmonthsembryonicdevelopmentstage．InCOS一7cells，ZNF540proteinislocalizedtonucleus．ZNF540isatranscriptionrepressorbyKRABmotifandzincfingermoti

10、fwhenfusedtoGal-4DNA·bindingdomainandcotranfectedwithVP一16．OverexpressionofZNF540inCOS一7cellsinhibitsthetranscriptionalactivitiesofSREandELK一1，suggestingthattheZNF540proteinmayactasatranscriptionalrepressorinmitogen—activatedproteinkinase(MAPK)signalingpathwaytomediat

11、ecellularfunctions．Itsintereactionproteinswerescreenedbyyeasttwo—hybridsystemand96bluecoloneswereobtained．Theresultsofsequen