人类心脏发育候选基因hlbh的克隆与功能研究

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1、湖南师范大学硕士学位论文人类心脏发育候选基因hLBH的克隆与功能研究姓名：艾建平申请学位级别：硕士专业：发育生物学指导教师：吴秀山;王跃群20050501摘要心脏是脊椎动物器官发生过程中最早形成的器官之～。心脏发育是一个复杂的过程，它受～系列基因的精确调控。鉴定在心脏发育过程中起调控作糟的基因和分子途径，将促进人们扶分子水平认识心脏发育和先天性心脏瘸发生的机制。在心血篱系统疾病的研究中已发现，菜垡基因在对空上酶表达紊乱可导致先天毪心蕴瘸，而对部分心盘簿系统病症舞发入群兹醣究恣涯鹗部分惹天影凌戆心薤瘸与遗传因素有关。通过人类胚胎心脏文露克隆到了一个重要的人类基因hLBIloh

2、LBH的cDNA长3053bp，编码一个105个氯基酸残基的蛋白。其蛋白壤在进化上从斑马趣，小鼠到人类高度保守。Northernblot结果检测到了一个3．Ikb的转录本，彪臃胚胎和成人时期薇心脏有强烈的表达。在COS．7细胞中，与绿色荧光蛋白熬转染实验表昵该蛋自定位予胞核与胞质之中：随詹将hLBH与Gal4一DNA结合区域形成融合蛋白后，与VPl6一起共转染，通过荧光素酶检测实验表绢，hLBH是一个转录激活园子。hLBH蛋怠在COS．7细貔中避表达后，激活了SRE和AP-I的活性，这些结果表骥hLBH霹栽是一个转蒙激活嚣予遴遗漱涨信弩途径奔导缁艟功能。分裂去掉K寒蜷依羧予

3、膦懿酸的丝筑夔／苏氮黢滋酶链点鞫e末羰ERK—D摸体艨的实验表明，纛‘端依赖予臆氨羧效丝氨酸／苏氨羧激酶位点和3‘端ERK-D模体在基因的转录激活中越了重要的作用。IV关键调：羹耍熬转秉调控因子；基因袭达：早絮心脏发育；囊继强MAPK信母途径：依赖于脯氮酸的丝氨酸／潦氨酸激酶佼点，RRK—D模体：AbstractTheheartisoneoffirstorganstoformduringorganogenesisinthevertebrate．Cardiogenesisisaverycomplexprocessanditrequirespreciseregulationof

4、seriesofgenes，Theidentificationofthemolecularpathwaysthatguideheartmorphogenesiswillprovideabasicunderstandi矬gofhowheartiSformedandofhowcongenitatheartdiseases(CHD)aretakenplace．Asitknown，mistakesinspatiotemporalexpressionofcriticalgenesresultincongenitalcardioVasculardiseases．Furthermore．

5、studiesonhighriskpopulationofcardiovasculardiseasehavealsosuggestedtherelationshipbetweennonconge摊量t8王cardiovasculardiseasesandgenetiefactors。Herewereporttheidentificationandcharacterizationofanovelhumangene，寿翻鹾fromahumanembryonichearteDNAV1ibrary．ThecDNAofhLBHis3053bp，encodingaproteinof10

6、5aminoacids．Theproteinishighlyconservedinevolutionacrossdifferentspeciesfromzebrafish，mouse，tohumanNorthernblotanalysisindicatesthata3。1kbtranscriptspecificforhLBHismostabundantlyexpressedinembryonicandadultheart。InCOS一7cells，hLBHproteinislocalizedtonUCleusandcytoplasm．hLBffisatranscriptio

7、nactivatorwhenfusedtoGal一4DNA—bindingdomainandeotransfected鬻lthVp—16．0verexpressionofhLBHinCOS一7cellsactivatesthetranscriptionaIactivitiesofSREandAP一1．TheseresultssuggestthathLBHproteinmayactasatranscriptionalactivatorinmitogen—activatedproteinkinasesignalingp