粉玉体色瓯江彩鲤mhcⅱ类基因多态性与鱼体抗病力的关系及补体c9基因的全长克隆与表达

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1、学校代码：10264研究生学号：M100102150上海海洋大学硕士学位论文“粉玉”体色瓯江彩鲤MHCII类基因多态性题目：与鱼体抗病力的关系及补体C9基因的全长克隆与表达MHCclassIIgenepolymorphismanditsassociationwithdiseaseresistance,andfulllength英文题目：cloningandexpressionofC9genein＂wholewhite＂colorpatternofCyprinuscarpiovar.color专业：水生生物学研究方向：鱼类

2、分子进化与免疫遗传学姓名：赵雪锦指导教师：刘至治副教授二O一三年五月二十五日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校

3、保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注唐文乔上海海洋大学教授主席李晨虹上海海洋大学教授委员程起群东海水产研究所研究员委员刘东上海海洋大学讲师秘书答辩地点生命学院B

4、344答辩日期2013.05.24上海海洋大学硕士学位论文“粉玉”体色瓯江彩鲤MHCII类基因多态性与鱼体抗病力的关系及补体C9基因的全长克隆与表达摘要本研究以“粉玉”体色瓯江彩鲤为对象，人工感染嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)后，一方面分析主要组织相容性复合体(Majorhistocompatibilitycomplex,MHC)II类α和β基因多态性及其与鱼体抗病力之间的关系；另一方面，采用RACE技术，获得补体C9基因cDNA的全长序列，并通过实时荧光定量PCR技术检测了C9基因在各正常组织及

5、感染嗜水气单胞菌后不同时段的组织表达情况。研究结果将为“粉玉”体色瓯江彩鲤的抗病育种提供重要的基础资料。主要研究结果如下：1、MHCclassIIβ基因的多态性及其与鱼体抗病力的关系从30尾感病和13尾抗病“粉玉”体色瓯江彩鲤的cDNA中扩增出长度为624bp的MHCclassIIβ基因片段。对210个有效克隆进行测序，获得84个不同的编码序列，分属13个不同的等位基因，其中Cyca-DAB3*17和Cyca-DAB3*18为新发现的2个等位基因。核苷酸、氨基酸变异位点总数为267、130，变异率较高(42.79%、62

6、.50%)。MHCclassIIβ基因片段包括第14个外显子，分别编码信号肽、β1和β2结构域及跨膜区。β1结构域的变异明显大于β2结构域，表现为在长度为276bp的β1结构域中，核苷酸、氨基酸变异位点分别为150个(54.35%)和72个(78.26%)；而长度为282bp的β2结构域的核苷酸、氨基酸变异位点较少，分别为105个(37.23%)和54个(57.45%)。在β1结构域的24个抗原结合位点(Peptidebindingregion，PBR)上，有22个发生了变异。β1结构域的PBR、非抗原结合位点(non

7、-PBR)及β2结构域的非同义碱基替换率(dN)与同义碱I上海海洋大学硕士学位论文基替换率(dS)的比值ω分别为1.366、0.992、0.792，表明“粉玉”体色瓯江彩鲤MHCclassIIβ基因的β1结构域在进化过程中受到正向选择作用。基因Cyca-DAB3*09在抗病群体中出现的频率(7.81%)显著高于感病群体(1.37%，P<0.05)，新等位基因Cyca-DAB3*18(频率为3.13%)只出现在抗病群体中，基因Cyca-DAB1*08、Cyca-DAB3*08和Cyca-DAB3*17为感病群体所特有。2、

8、MHCclassIIα基因的多态性及其与鱼体抗病力的关系对43尾“粉玉”体色瓯江彩鲤的207个有效克隆进行测序，获得105条不同的MHCclassIIα编码序列，分属11个不同的等位基因，Cyca-DXA13、Cyca-DXA14、Cyca-DXA15和Cyca-DXA16为新发现的4个等位基因。核苷酸、氨基酸变异位