全红体色瓯江彩鲤mhc多态性及其与鱼体抗病力关系的分析

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1、学校代码：10264研究生学号：M090102124上海海洋大学硕士学位论文“全红”体色瓯江彩鲤MHC多态性及其与题目：鱼体抗病力关系的分析Majorhistocompatibilitycomplexpolymorphismanditsassociationwithdisease英文题目：resistancein＂wholered＂colorpatternofCyprinuscarpiovar.color专业：水生生物学研究方向：鱼类分子进化与免疫遗传学姓名：李雪松指导教师：刘至治副教授二O一二年五月四日1上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我

2、恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以

3、采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注唐文乔上海海洋大学教授主席程起群东海水产研究所研究员委员张庆华上海海洋大学副教授委员委员委员委员委员刘东上海海洋大学讲师秘书答辩地点水产与生命学院B105答辩日期5月18日“全红”体色瓯江彩鲤MHC多态性及其与鱼体抗病力关系的分析摘要主要组织相容性复合体(MajorHistocompatibilityComplex,MHC)是存在于

4、脊椎动物体内与免疫功能密切相关的高度多态的基因群。许多研究表明，MHC不同等位基因与机体的抗病力密切相关。本研究以分布于我国浙江省瓯江流域的地方性鲤科鱼类——瓯江彩鲤(Cyprinuscarpiovar.color)为对象，通过人工感染嗜水气单胞菌(Aeromonashydrophila)后，分析“全红”体色瓯江彩鲤MHC基因家族中MHCIα、MHCIIα和MHCIIβ等位基因的多态性及其与鱼体抗病力之间的关系。研究结果将为瓯江彩鲤抗病相关基因的筛选及抗病育种奠定基础。主要结果如下：1、“全红”体色瓯江彩鲤MHC-DAB基因多态性及其与鱼体抗病力关系的

5、分析利用一对特异性引物DABF和DABR，分别从21尾感病和16尾抗病“全红”体色瓯江彩鲤的cDNA中，扩增出长度为624bp的MHC-DAB基因片段。共测序185个有效克隆，获得76个不同的核苷酸序列。MHC-DAB基因片段包括第1~4外显子，分别编码信号肽、β1和β2结构域及跨膜区。长度为276bp的β1结构域有144个核苷酸变异位点(52.17%)和70个氨基酸变异位点(76.07%)，而长度为282bp的β2结构域只有98个核苷酸变异位点(34.75%)和50个氨基酸变异位点(53.19%)，显示β1结构域的变异要明显大于β2结构域。在β1结构

6、域的24个抗原结合位点(PBR)上，有23个发生了变异。β1结构域的PBR、非抗原结合位点(non-PBR)及β2结构域的ω值(ω=dN/dS)分别为1.367、0.886和0.754，表明“全红”体色瓯江彩鲤MHC-DAB基因（特别是β1结构域）在进化过程中受到正向选择作用。在所得的20个不同的等位基因中，基因DAB3*15在抗病群体中出现的I频率(13.75%)显著高于感病群体中出现的频率(3.81%)(P<0.05)；基因DAB3*09和DAB3*10的出现频率都为3.75%(P<0.05)，仅存在于抗病群体中；而基因DAB3*02和DAB3*1

7、4的出现频率分别为7.62%(P<0.05)和8.57%(P<0.01)，仅存在于感病群体中。2、“全红”体色瓯江彩鲤MHCIIα基因多态性及其与鱼体抗病力关系的分析根据已知鲤(Cyprinuscarpio)的主要组织相容性复合体MHCIIα基因序列设计特异性引物，分别从21尾感病和16尾抗病“全红”体色瓯江彩鲤cDNA中扩增了包括MHCIIα基因完整外显子2和外显子3在内的长度为624bp的基因片段。共测序180个有效克隆，获得85条不同的核苷酸序列，分属10个不同的等位基因。MHCIIα基因片段包括第1~4外显子，分别编码信号肽、α1和α2结构域及

8、跨膜区。α1结构域的变异要明显大于α2结构域，表现在：长度为252bp的α1结构域有105个核