瞬时受体电位通道trpm8在人乳腺癌细胞中的表达及其对细胞迁移能力的影响

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1、南方医科大学2010级博士学位论文瞬时受体电位通道TRPM8在人乳腺癌细胞中的表达及其对细胞迁移能力的影响Transientreceptorpotentialmelastatin8ispresentinhumanbreastcancercellandisimplicatedinitscellmigration课题来源：自选学位申请人导师姓名专业名称培养类型培养层次所在学院答辩委员会主席答辩委员会委员刘锦新罗荣城教授肿瘤学术型全日制博士南方医院陈尊器教授盛信秀教授易基群教授金国萍教授陈继跃教授冯忻教授欧阳平教授2014年3月18曰广州博士学位论文瞬时受体电位通道TRPM8在人乳腺癌细

2、胞中的表达及其对细胞迁移能力的影响博士研究生：刘锦新指导教师：罗荣城教授摘要恶性肿瘤是一种临床上常见、高发、难早诊断、难治愈、严重危害人类生命和健康的慢性疾病，现已成为全球重大的公共卫生问题。研究表明中国2009年全国肿瘤登记地区恶性肿瘤发病率为285．91／10万，恶性肿瘤死亡率为180．54／10万。2009年中国女性恶性肿瘤发病第1位的是乳腺癌，转移性乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，全球每年约有120万妇女发生乳腺癌，其中有一半左右的患者在10年内死亡，国内转移性乳腺癌的发病率呈现递增的趋势，己成为部分城市妇女中占首位的恶性肿瘤，而且发病年龄越来越趋向于年轻化。恶性肿瘤给我国

3、人民的生命和健康造成巨大威胁，给社会和家庭带来巨大经济压力和心里负担。恶性肿瘤的治疗方法主要是手术治疗、放射治疗、化学治疗、生物治疗、介入治疗、射频治疗、冷冻治疗、激光治疗及中医药治疗等，但肿瘤细胞的耐药性及转移仍然是严重遏制恶性肿瘤治疗有效性的主要因素。侵袭和转移是恶性肿瘤患者的重要死因，90％以上的恶性肿瘤患者最终死于肿瘤转移或者复发，现有的常规治疗手段尚无法从根本上清除恶性肿瘤，了解恶性肿瘤侵袭、转移发生的关键机制，揭示恶性肿瘤侵袭及转移的分子作用机制及可能的干预措施也成为当今国、内6'1-1]中瘤基础及临床研究热点。肿瘤侵袭与转移过程非常复杂，尽管不同种类肿瘤的侵袭、转移特

4、性有所中文摘要不同，但侵袭、转移过程中的关键步骤基本相同。侵袭是指恶性肿瘤细胞侵犯和破坏周围正常组织进入循环系统的过程。转移是指侵袭中的癌细胞迁移到特定组织器官并发展成为继发性癌灶的过程。侵袭和转移是同一过程中的两个不同阶段，侵袭是转移的前奏，转移是侵袭的结果。肿瘤转移包括粘附、侵袭和迁移三个过程，对于肿瘤转移的机理，Liotta提出的癌细胞侵袭、转移的三步骤假说是目前较为认可的。三步骤假说：①肿瘤细胞之间的解黏附和肿瘤细胞与细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)之间的黏附；②侵足的形成与ECM的降解：肿瘤细胞和宿主细胞分泌的蛋白水解酶，使肿瘤细胞周围的发生降

5、解；③运动，肿瘤细胞被生长因子及趋化因子诱导，向纵深运动。深刻理解肿瘤细胞侵袭和转移的分子机制将为诊断和治疗恶性肿瘤提供新的策略，抑制肿瘤的侵袭、转移过程将会成为肿瘤治疗的新靶点。近10年来，瞬时受体电位通道(transientreceptorpotentialchannels，TRPchannels)与恶性肿瘤的关系在某种程度上已越来越明确，TRP通道参与受体激活、细胞异常增殖、分化、损伤乃至死亡，从而导致恶性肿瘤细胞不可控制的增殖和侵袭。越来越多的学者致力于TRP通道的生理功能及其在癌症发生、发展中的变化方面的研究。瞬时受体电位通道M型(melastatin-relatedtr

6、ansientreceptorpotential，TRPM)是位于细胞膜上的一类重要的阳离子通道家族。TRPM8分布广泛，TRPM8在某些肿瘤的发生、发展中起重要作用。己有研究表明TRPM7与乳腺癌的转移、侵袭有关，也有研究结果表明TRPM8在人乳腺癌组织中过度表达，而TRPM8也已经成为前列腺癌病人预后不良的一个临床指标，TRPM8的作用机制研究为肿瘤基础研究提供思路和线索。本研究试图从TRPM8在乳腺癌组织、乳腺正常组织的表达差异及运用基因沉默和稳定转染技术初步研究TRPM8在乳腺癌细胞迁移中的可能作用来探讨TRPM8作为抑制乳腺癌转移的分子靶点的可能性，为乳腺癌早期诊断、治疗

7、评价及判断预后提供参考。II博士学位论文方法1．检测人体乳腺癌旁组织与乳腺癌组织中TRPM8基因、蛋白水平表达选取4组配对的乳腺癌旁组织及癌组织标本为研究受试对象。采用QPCR、WesternBlot方法分别在mRNA、蛋白表达水平检测TRPM8在人体乳腺癌旁组织与乳腺癌组织之间的表达量是否存在差异。2．检测人正常乳腺上皮细胞株与人乳腺癌细胞株TRPM8基因、蛋白水平表达选取正常乳腺上皮细胞株MCF．10A以及不同转移能力乳腺癌细胞株MCF一7、T47D、MDA—MB