白芍总苷在大鼠体内的排泄及其对cyp3a蛋白表达的影响

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1、河北医科大学硕士学位论文白芍总苷在大鼠体内的排泄及其对CYP3A蛋白表达的影响姓名：潘会敏申请学位级别：硕士专业：中药学指导教师：牛丽颖201203中文摘要白芍总苷在大鼠体内的排泄及其对CYP3A蛋白表达的影响摘要目的：白芍总苷(Totalglucosidesofpaeony，TGP)是自白芍根中提取的有效部位，以芍药苷(Paeonlflorin，Pae)和芍药内酯苷(Albiflorin，Alb)的含量最高。课题组前期比较了TGP在正常和急性CCl4肝损伤大鼠体内的药代动力学参数，发现其在正常和病理状态下的参数明显不同，并对TGP的胃肠吸收、血浆蛋白结合率、组织分布等特点进行

2、了研究。为进一步研究TGP的药代动力学，明确其体内排泄特点，研究TGP对肝药酶CYP3A蛋白表达的影响，本实验以HPLC法为手段，采用固相萃取方法同时测定Pae和Alb在大鼠尿液、粪便和胆汁中的含量，明确TGP的主要排泄途径，同时以正常大鼠和急性CCl4肝损伤大鼠为实验对象，采用WesternBlot法观察TGP对大鼠CYP3A蛋白表达的影响，探讨TGP保肝作用的相关机制。方法：1白芍总苷在大鼠体内的排泄研究1．1色谱条件采用phenomenexC18色谱柱(4．6x250mm，5“m)，流动相均为乙腈一0．1％冰乙酸，尿液样品流动相比例为16：84，粪便及胆汁样品比例均为13

3、：87；流速1mL／min；检测波长232rim；柱温25。C；进样量均为l0止。1．2样品预处理1．2．1尿样预处理精密量取尿样O．4mL，加入蒸馏水O．2mL及内标龙胆苦苷溶液20止，涡旋混匀后通过已活化的固相萃取小柱，先用10％的甲醇2mL淋洗杂质，继用甲醇1mL洗脱，洗脱液定容至lmL，离心(12000r／min)，取上清液10此进样分析。1．2．2粪便预处理将粪便样品于．40。C保存24h以上，冷冻干燥，称定重量，研碎，取粪便冻干粉0．01g，加入1mL蒸馏水，涡旋混匀5min，离心(12000r／min)10min，取上清液O．2mL，加入蒸馏水O．2mL及内标龙胆

4、苦苷溶液20此，中文摘要涡旋混匀，其余处理同“尿样预处理”。1．2．3胆汁预处理取胆汁样品0．2mL，其余操作同“尿样预处理”。1．3排泄研究1．3．1TGP在大鼠尿液和粪便中的排泄Wistar大鼠5只，置代谢笼中，灌胃给予TGP水溶液(1．41g／kg)，分别收集各时间段尿液及粪便，HPLC法测定样品中Pae和Alb浓度，根据随行标准曲线计算各自含量。1．3．2TGP在大鼠胆汁中的排泄大鼠灌胃给予TGP水溶液(1．41g#kg)，腹腔注射25％乌拉坦麻醉，分离胆总管并行胆管插管引流术，收集各时间段的胆汁，HPLC法测定样品中Pae和Alb浓度，根据随行标准曲线计算各自含量。2

5、白芍总苷对正常大鼠CYP3A蛋白表达的影响25只大鼠按体重随机分为5组(正常对照组，TGP低、中、高剂量组，阳性对照组)。正常对照组给予纯化水，TGP低、中、高剂量组大鼠分别灌胃给予TGP0．47、1．41、2．82g／kg，连续14天；阳性对照组于第11天腹腔注射地塞米松75mg／kg，连续4天。第15天将各组大鼠断头处死，取肝，差速离心法制备肝微粒体，WestemBlot法检测CYP3A蛋白表达。3白芍总苷对急性CCl4肝损伤大鼠CYP3A蛋白表达的影响30只大鼠按体重随机分为6组(正常对照组，模型组，TGP低、中、高剂量组，阳性对照组)。正常对照组与模型组给予纯化水，TG

6、P低、中、高剂量组大鼠分别灌胃给予TGP0．47、1．41、2．82∥kg，阳性对照组大鼠给予联苯双酯O．2g／kg，连续14天。于末次给药后2h，除正常对照组注射等量生理盐水，其余5组均皮下注射50％CCl4玉米油复制急性CCl4肝损伤模型，16h后将大鼠断头处死，取血分离血清测定ALT、AST；取肝，称总重，计算肝脏系数；肝左叶的相同部位用lO％甲醛溶液固定，常规石腊包埋，HE染色，光镜下观察组织损伤程度；部分肝组织差速离心法制备肝微粒体，WesternBlot法检测CYP3A蛋白表达。结果：1白芍总苷在大鼠体内的排泄研究中文摘要1．1方法学考察大鼠尿液、粪便和胆汁中Pae

7、、Alb及内标峰在本条件下专属性良好，阴性无干扰，日内和日间精密度RSD均在10％以内，准确度均在90％'---"110％之间，两者及内标的提取回收率均在90％以上，样品预处理前后室温放置和冻融循环后仍保持稳定。1．2TGP在大鼠尿液、粪便和胆汁中的排泄大鼠灌胃给予1．41g／kgTGP后，48h尿液和粪便及36h胆汁中芍药苷的累积排泄量分别为(610．0士53．9)、(60630．4+4546．3)、(5640．3+504．3)¨g，占给药量的(0．583+0．042)％、(59．11±6