tlr4激活在糖尿病肾病炎症反应中的机制研究

《tlr4激活在糖尿病肾病炎症反应中的机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．4英文缩写⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．8研究论文TLR4激活在糖尿病肾病炎症反应中的机制研究引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．9第一部分高糖状态对HK．2和THP．1细胞TLR4激活的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11刚舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·l1材料与方

2、法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·22附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·24讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·30小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·32参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··33第二部分TLR4高表达在大鼠糖尿病模型中的相关研究前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯·36日lJ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯‘36材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··37结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·43附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．46讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·56小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·58参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯59结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61综述巨噬细胞在糖尿病肾病发病中的作用⋯⋯⋯⋯_⋯⋯⋯⋯⋯⋯62致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·76个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯77中文摘要TLR4激活在糖尿病肾病炎症反应中的机制研究摘要目的：糖尿病肾病(diabeticnephropathy，DN)是糖尿病(diabetesmellitus，DM)最严重的并发症之一，也是导致慢性肾衰竭的主要原因之一。其发病机制复杂，近些年慢性炎症反应

5、在DN中的作用机制备受关注。Toll样受体4(Toll．1ikereceptor4，TLR4)在介导多种细胞的信号激活及炎症反应中发挥重要作用，目前其在DM和DN发病中的作用逐渐受到关注，临床和实验研究中均证实高糖状态下多种细胞TLR4的表达显著升高，但是TLR4升高在DM及DN发生发展中的详细机制尚未完全阐明。因此，本课题依据文献和前期实验结果，拟通过体内、体外研究高血糖状态下高表达的TLR4，在不同配体的刺激下对肾小管上皮细胞、巨噬细胞炎症因子的产生的影响，探讨TLR4激活在DN发病中的作用机制，以及对巨噬细胞

6、募集、1肾组织纤维化等的调节作用，从而提出新的针对DN炎症反应的治疗策略，为DN免疫治疗提供实验依据。方法：1研究高糖对HK-2和TRP．1细胞TLR4表达及炎症反应的影响：用含不同浓度葡萄糖的1640培养基培养HK-2和THP．1细胞，用免疫荧光技术和流式细胞仪检测细胞表面TLR4的表达水平。分别用LPS和HSP60刺激含不同浓度葡萄糖培养的细胞，在不同时间段(2、4、6、8h)收集细胞，Real—timePCR检测炎症因子(n师．Q、MCP．1、IL．6、IL-8)mRNA表达。2研究巨噬细胞激活后上清对HK．

7、2细胞的影响：用LPS刺激THP一1后的上清液作用于HK．2细胞，观察炎症因子的产生。THP．1细胞用高糖培养基培养，经LPS刺激24h后取上清与高糖培养基培养的HK．2细胞混合，在不同时间点收集细胞，Real．timePCR检测HK．2细胞mRNA表达；Westernblot检测NF—r．．Bp65表达水平；免疫组化检测FN表达水平。3制备2型糖尿病大鼠模型：腹腔注射低剂量STZ(45mg／kg)，72h后取尾静脉血测定血糖，两次检测浓度均大于16．7mmol／L时为造模成功。4动态观察DM大鼠腹腔巨噬细胞激活的

8、炎症反应：在DM的2、4、中文摘要8、12w取大鼠腹腔巨噬细胞，用LPS刺激2、4、6h后收集细胞，Real—timePCR检测n师．Q和IL．1p表达水平；在DM的2、4、8、12w取大鼠腹腔巨噬细胞，分别用LPS、HSP60刺激48h后收集上清，ELISA检测上清中TNF．a和IL．1D的水平。5动态观察DM大鼠的肾脏的炎症反应：在DM的2、4、8、12