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1、量子点为载体转染survivinsiRNA至人舌鳞癌Tca8113细胞探究［摘要］目的靶向survivin基因的siRNA通过量子点为载体转染至人舌鳞癌Tca8113细胞中，研究其对survivin基因表达的影响，为量子点在肿瘤的基因治疗方面提供实验依据。方法SurvivinsiRNA通过量子点转染至人舌鳞癌Tca8113细胞中，同时设立LIPOFECTTAMINE2000脂质体为转染载体的对照组以及未转染的空白组，采用实时定量RT-PCR检测各组Tca8113细胞中survivinmRNA表达的改变情况。结果实验组用50pmolQD转染100pmolsurvivinsiRNA入Tca81
2、13细胞48h后，检测到survivinsiRNAmRNA表达量相对于空白组下降64%,QD与siRNA的使用比例为1：2；对照组中用100pmollipofectamine2000脂质体转染100pmolsurvivinsiRNA入Tca8113细胞48h后，检测到survivinsiRNAmRNA表达量相对于空白组下降90%,QD与siRNA的使用比例为1：1。结论量子点为载体转染survivinsiRNA能够有效的抑制Tca8113细胞survivinmRNA的表达，量子点有望作为RNA干扰技术的新型载体。［关键词］量子点；舌鳞癌Tca8113细胞;siRNA［中图分类号］R19［文
3、献标识码］A［文章编号］1674-0742(2013)08(b)-0001-04人类肿瘤的发生、发展大多是由于基因的改变致细胞凋亡的异常引起的。人体常见的口腔肿瘤细胞中，survivin基因的水平一般都会升高，它会抑制细胞凋亡。细胞凋亡与增殖一样，是一个高度可调节性的生物化学过程。RNA干扰(RNAinterference,RNAi)成为目前的热点研究之一，它是多种生物体内由双链RNA(doublestrandedRNA,dsRNA)分子介导的基因阻抑现象，通过导入外源或内源的dsRNA,细胞内加工后产生siRNA(小分子干扰RNA片段)可以特异性阻滞基因的表达，使内源性mRNA发生特异性
4、降解，从而引起转录后基因沉默(post-transcriptionalgenesilencing,PTGS)o量子点(quantumdot,QD)是一种直径在1〜lOOnm的半导体纳米颗粒，而粒径在2〜10nm的量子点可通过内吞作用进入细胞。QD具有特殊的光学特性，单一种类的QD能按照尺寸变化产生发光波长不同、颜色分明的荧光，并且这种荧光的强度和稳定性都大大优于有机荧光染料，可以让研究人员更长时间地观察细胞或组织；此外，QD具有良好的生物相容性，对细胞的毒性低。2010年1月一2012年9月在该研究中，利用量子点作为非病毒的基因转染载体，对口腔鳞癌Tca8113细胞中高表达的凋亡抑制基因S
5、urvivin的siRNA进行修饰并转染至人舌鳞癌Tca8113细胞中，达到有效抑制survivin基因的表达至肿瘤细胞凋亡的目的。以期望对口腔鳞癌细胞中高表达的凋亡抑制基因Survivin基因沉默提供理论和实践依据，探索出一种安全，低毒，高效并可进行动态观测的siRNA转运载体。1材料1.1转染所需设备试剂(1)人舌鳞癌Tca8113细胞(2)SurvivinsiRNA：20nmol冻干粉(3)量子点(QD605)：表面带正电荷的水溶性量子点,4mol/L(4)LIPOFECTAMINE2000脂质体(5)OPTI-MEMI培养基(6)荧光显微镜：OLYMPUS,1X511.2实时定量R
6、T-PCR所需主要试剂及设备1.2.1主要试剂①TrizolRNA提取试剂；②氯仿；③异丙醇；④无水乙醇；⑤SYBRGreenPCRMasterMix；⑥焦碳酸二乙酯(DEPC)；©TBE电泳缓冲液：Tris碱54g,硼酸27.5g,0.5mol/EDTA(PH：&0)20mL,加双蒸水600mL,剧烈搅拌至溶解，加水至1000mL定溶，即为5XTBE,用时加双蒸水稀释成0.5XTBE；⑧核酸染料。1.2.2主要设备①高速冷离心机：Heraeus,Megafuge1.0R；②定量PCR仪：ABIPRISM7500*SequenceDetectionSystem；③电热恒温鼓风干燥箱：Her
7、aeus,UT6；④Eppendof管、Tip头等均用0.1%的DEPC水浸泡过夜，用无菌蒸憎水冲洗后，高压灭活DEPC活性，371烤箱烘干备用；⑤电热恒温水浴锅：Grant,0LS200；⑥凝胶成像分析系统：Tanonl600；⑦电泳仪：Tanon,DYY-6X型；⑧纯水制备系统:Millipore；⑨医用微波炉：Galanzo2方法1.1Tca8113细胞的培养细胞传代培养到3〜4代时用于实验。1.2量子点介导sur
