丁苯酞注射液对vci大鼠海马神经元

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1、分类号学校代码10542密级学号201002202104丁苯酞注射液对VOI大鼠海马神经元CaIbindin-D28k表达的影响Thehippocampalneurons，Calbindi—D28kexpressionattheactionofNBP--injectioninVCIrats指导教师姓名、职称銎竖塾撞湖南师范大学学位评定委员会办公室二零一三年五月摘要目的：本研究在Wistar大鼠认知功能障碍(VCl)模型的基础上，结合病理检测、认知功能检测和免疫组化蛋白定量、荧光定量PCRlllRNA检测、流式细胞仪Ca2+定量，以及用丁苯

2、酞注射液干预后的Calbindin—D28k(CaBP)表达的对比。初步探讨CaBP在凋亡神经细胞中的作用及丁苯酞注射液的保护作用。方法：所有动物造模前先用Morris水迷宫定位航行实验进行筛选，淘汰学习记忆能力差的大鼠，获得2509-3009健康雄性Wistar大鼠36只。将36只合格大鼠称重，排序，采用随机数字表法分为3组：正常组(normalgroup)(n=4)、VCI模型组(modelgroup)(n=16)、药物组(druginerwentiongroup)(n=t6)。利用双侧颈总动脉永久结扎术(2-VO)建立大鼠VCI模型

3、。按照造模后处死时间将3组随机分为一周组(1w)、2周组(2W)、4周组(4W)、8周组(8W)四个亚组，正常组每组1只，其余分组每个亚组4只动物。用Morris水迷宫定位航行及空间探索实验对8W大鼠的记忆及学习能力进行测定；采用脏染色观察病理学变化；应用免疫组织化学检测CaBP在神经细胞内表达水平的动态变化；采用荧光定量PCR检测细胞内CaBP-mRNA表达的变化。采用流式细胞仪测定海马细胞内C才+浓度。结果：1、免疫组化：正常组各时间点可见CaBP免疫阳性细胞正常表达，模型组1W时表达高于正常组，1W以后免疫阳性细胞表达逐渐下降，且均

4、低于正常组。药物组较正常组高表达，1W-8W逐渐下降，至8W时降至正常或稍低于正常组(P>0．05)。其中1w、2w、4w组与正常组差异有统计学意义(P<0．05)。同时间点药物组与模型组比较，药物组CaBP免疫阳性细胞数目较多，表达差异均有显著意义(P<0．05)。2、荧光定量PCR：CaBP—mRNA的荧光定量PCR检测结果示1-8W总体表达逐渐下降，药物组1W、2w高表达，4W组稍高表达，8w组降至正常或稍低于正常组(P>0．05)，与免疫组化结果吻合。模型组总体表达亦呈下降趋势，1W时高表达，1W后明显低于正常组。药物组1、2、4

5、W组与正常组表达有差异(P<0．05)，8W组与正常组同一水平(P>0．05)。模型组1W、4W、8W组较正常组表达有差异(P<0．05)，2W组与正常组差异无统计学意义。模型组与药物组各时间点表达均有差异，表达差异均有统计学差异意义(P<0．05)。3、细胞内Cf+：模型组各时间点均高表达，较正常组、与药物组有明显的差异(P<0．05)。药物组1W、2W组稍高表达，较正常组无明显差异(P>0．05)，4W、8W组高表达，较正常组表达差异有统计学意义(P<0．05)。结论：1、大鼠慢性脑缺血损伤后CaBP参与了大鼠脑缺血神经元凋亡的病理生

6、理过程，可降低细胞内Ca2+浓度，避免钙超载，起到神经保护作用；2、丁苯酞注射液可促进海马细胞内CaBP的表达，改善血管性认知功能障碍大鼠的学习和记忆能力。关键词：VCI，丁苯酞注射液，CaBP，Ca2+AbstractObjective：ThisstudywasonthebasisofCognitivedysfunctionmodelbywistarratsCombiningwithpathology，cognitivefunctionanddrugintervention，DiscussedtheCalbindin．D28k(CaBP

7、)，Ca2+expressionchangesinVCIrat’hippocampuscells，andtheexpressionofNBPinjectionaftertheintervention．PreliminarydiscussiontheCaBP’roleintheapoptosisofnervecellsandtheprotectiveeffectofNBP-injection．Method：PrepareseveralhealthymaleWistarratswhichweightbetween2509一3009．Allth

8、eanimalsscreeningwithMorriswatermazeexperimentalbeforebuildingnavigation．Eliminatetheratswithpoo