大米肽酶法制备方法的研究

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1、万方数据分类号：TQ936密级：(秘密、机密、绝密)学校代码：10057研究生学号：11810003大米肽酶法制备方法的研究StudyonthePreparationofRicePeptidesbyEnzymaticHydrolysis专业名称：生物化工指导教师姓名：路福平教授研究生姓名：吕志佳申请学位级别：工学硕士论文提交日期：2014年5月论文课题来源：自选项目学位授予单位：天津科技大学万方数据天津科技大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究工作所取得的成果。除文中特别加以标注引用

2、的内容外，本论文不包括任何其他个人或集体己经发表或撰写的成果内容，也不包括为获得天津科技大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：吕恚、钍日期：劢／#-年6月7日知识产权和专利权保护声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师具体指导下并得到相关研究经费支持下完成的，其数据和研究成果归属于导师和作者本人，知识产权单位属天津科技大学；所涉及的创造性发明的专利权及使用权完全归天津科技大学所有。本人保证毕业后，以本论

3、文数据和资料发表论文或使用论文工作成果时署名第一单位仍然为天津科技大学。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：吕悉≥0至一日期：力／q-年6月7日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，同意公布论文的全部或部分内容，允许论文被查阅和借阅。本人授权天津科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密【l(请在方框内打“、／”)，在年解密后适用

4、本授权书。本学位论文属于作者签名：导师签名：日日97／bg年年铲伴-f，刎力期期L日日巾“打内框方在万方数据摘要大米多肽具有较高的营养价值和丰富的保健功能，国内外市场对其需求很高。蛋白酶水解法因其绿色和安全性成为多肽制备的主要方法。但是酶法制备大米肽，目前存在得率较低等瓶颈问题，制约了酶法的工业应用。本论文通过对大米肽酶法制备方法的深入研究，致力于提高大米肽的得率，降低大米肽的苦味，最终制备高品质的大米肽。本文具体在多肽指标的检测方法、酶液脱色、大米肽提取动力学、大米肽得率限制因素及其改善方法、脱苦方法和小规模制备工艺等方面

5、开展了具有一定成效的研究。酶法制备多肽研究中，需要测定分子量分布、多肽含量、游离氨基酸含量和水解度等指标，但这些指标目前通过不同的方法测定，较为繁琐，本研究探索通过凝胶过滤色谱法同时测定这四种指标。对比发现新方法测定结果与常规方法测定结果存在良好的线性相关性，相关系数达到了0．95以上，证明新方法同时测定四种指标的可行性。比较了活性炭法、超滤法、硫酸铵盐析法和硫酸铵盐析．超滤法对碱性蛋白酶的脱色和纯化效果，发现硫酸铵盐析．超滤法对碱性蛋白酶的脱色纯化效果最好，脱色率高达91．99％，酶比活力为641．76U／mg，总活力收率

6、为82．08％。目前酶法制备大米肽，得率较低，严重制约了其工业化应用。本文以大米肽得率为指标，研究了酶解时间、温度、初始pH、加酶量和固液比对大米肽得率的影响，结果表明酶解时间在4h，温度55℃，初始pH11．0，加酶量O．8％和固液比1：12时对大米肽的提取较为合适，得率为46．11％；同时对不同加酶量条件下的大米肽提取过程进行了动力学研究，通过数据拟合和相关性评价，确定了一级二项动力学和二级动力学两种合适的模型，其中一级二项动力学模型显示，在一定条件下，大米肽得率随着酶解时间延长存在理论最大值。本文还研究了酶解过程中pH

7、变化、大米蛋白溶解状态和产物竞争性抑制对大米肽得率的影响，其中产物竞争性抑制对大米肽得率的影响较大。通过碱性蛋白酶和中性蛋白酶双酶分步酶解方法，一定程度上降低了pH变化和产物竞争性抑制对大米肽得率的影响，将大米肽的得率由41．2％显著增加到了60．7％，增幅将近20％。另外，苦味也是影响多肽品质的重要指标，本论文研究了脯氨酰内肽酶的脱苦效果，结果显示该酶能够水解掉多肽末端的疏水性氨基酸，从而降低多肽的苦味。本研究建立了大米肽的小规模制备工艺，超滤选择5kDa截留孔径的超滤膜，喷雾干燥条件确定为进料速度500mL／h、进口温度

8、为120℃。利用双酶分步酶解法制备的多肽颜色洁白，苦味较低，并通过建立的凝胶色谱法测定了其关键的含量指标：多肽含量达到了76。4％，200～1200Da的寡肽含量达到48．76％，游离氨基酸含量为21．76％，水解度为32．03％。从各项指标来看，所得大米肽具有较高的品质。本研究取得的成果