丙泊酚对体外培养发育期海马神经元的神经毒性作用及机制研究

《丙泊酚对体外培养发育期海马神经元的神经毒性作用及机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．：⋯．．1英文摘要⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．：⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯．5研究论文丙泊酚对体外培养发育期海马神经元的神经毒性作用及机制研究引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．11第一部分原代大鼠海马神经元的培养、鉴定及形态学观察前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．12日U吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．12材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．13结果⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯17附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．19附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．21讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．22小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯23参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24第二部分丙泊酚对发育期海马神经元活力和凋亡的影响前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯．．26再U吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯．．Z0材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯．．26结果⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．28附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．30附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．34讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．36参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36第三部分Rho信号通路在丙泊酚致发育期海马神经元毒性中

4、的作用前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．38日l『舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．j芍材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．42附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯43。附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯．44讨j殓．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．45小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．46参考文

5、献⋯．⋯．⋯．．⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46结论⋯⋯⋯⋯．⋯⋯．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．47综述丙泊酚对发育期中枢神经系统神经毒性作用的研究进展⋯⋯⋯48致{射⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯57个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．⋯⋯⋯．58中文摘要丙泊酚对体外培养发育期海马神经元的神经毒性作用及机制研究摘要第一部分原代大鼠海马神经元的培养、鉴定及形态学观察目的：通过对新生24h内SD乳鼠海马神经元的培养，掌握大鼠海马神

6、经元体外培养方法；利用免疫荧光细胞化学方法鉴定神经元纯度；观察原代海马神经元形态学特点，测定细胞生长曲线。方法：取新生24h内的SD乳鼠，用75％乙醇消毒，断头，无菌条件下分层剪开皮肤和颅骨，暴露两侧大脑半球，弯镊取出大脑，置于预冷的DMEM液中，迅速分离出两侧海马组织，在解剖显微镜下去除血管和被膜，移入溶有木瓜酶的DMEM中，置于培养箱(370C，5％C02)中消化30min。用玻璃吸管将组织块移入加有10％血清的DMEM液中终止消化两次，每次2min。然后将组织块移入加有血清的DMEM液中，用进

7、口枪头轻轻吹打数次，静置后取上清液，如此重复2次。取0．9ml按台盼蓝拒染法进行活细胞计数，制成密度为1×106／ml的细胞悬液，种植于基膜包被的24孔培养板中，每孔加150m，置于370C，5％C02的培养箱内培养。4～6h后在倒置相差显微镜下观察神经细胞生长情况，全量换含有1％N2、2％B27的Neurobasal培养液。此后每2d半量换液，并在倒置相差显微镜下观察神经元生长情况。神经元培养7d后，4％PFA固定，0．3％Triton透膜，10％BSA封闭后滴加一抗p．Tubulin抗体(1：2

8、00稀释)，40C孵育过夜，加2％BSA稀释的Dylight488标记的二抗，370C孵育2h。10pg]ml的Hoechst33258复染细胞核，避光孵育20min。荧光显微镜下观察。在高倍视野(×200)下随机选取5个视野，计数阳性细胞数，换算为百分比，取均值作为神经元纯度。将细胞接种于96孔板，每隔两天测吸光度值，共测8次得出生长曲线。结果：1刚刚接种的细胞形态为圆形，体积小、透亮、呈悬浮状态，单个均匀分布，培养4～6h后细胞已贴壁，呈圆形或椭圆形，已有细胞出现