cdc2基因在绒山羊卵母细胞体外成熟过程中表达情况的研究

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1、学校代码】Q!堑UDC——论文题目学号i!!Q墨Q垒Q编号——研究生王拯指导教师奎重独塾援专业动物堂研究方向瞳塾动物生殖生物堂丞生物撞苤学院生金抖堂．雯暄二零一四年四月原创性声明一IY呲磐2㈧57剃16则0眦3掣本人声明：所呈交的学位论文是本人在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除本文已经注明引用的内容外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得内蒙古大学及其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本学位论文作者签名：丑抓指导教y币签名：学位论文作者签名：丑列叭指导教师签名：日期：硼f螂同碉日期：在学期间研究成果使用承诺

2、书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：内蒙古大学有权将学位论文的全部内容或部分保留并向国家有关机构、部门送交学位论文的复印件和磁盘，允许编入有关数据库进行检索，也可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编学位论文。为保护学院和导师的知识产权，作者在学期间取得的研究成果属于内蒙古大学。作者今后使用涉及在学期间主要研究内容或研究成果，须征学位论文作者签名：蠊指导教师签名：日期：Wf牛年6闰凋目期：摘要后期促进复合物或周期体(Theanaphase．promotingcomplexorcyclosome，APC／C)是一个泛素连接酶复合体，它控制着细

3、胞分裂的中期向后期的转换。在细胞中期，当染色体与纺锤丝正确连接时，Cdc20激活APC／C，进而启动一系列泛素化反应，染色体开始分离。这是一个保证细胞有丝分裂正常进行的重要机制。同样，其在减数分裂中也有着相同的作用。本研究中，我们分析了体外培养的卵母细胞中的Cdc20的表达情况，并对Cdc20进行了表达调控。我们构建了Myc-Cdc20载体，在将载体反转录成为cRNA之后通过显微注射的方法进行Cdc20的过量表达。此外，我们还通过westernblot的方法检测了正常体外培养条件下的GV、GVBD、MI和MII期卵母细胞的Cdc20的表达情况。首先，我们确定了在本实验

4、室体外培养条件下的绒山羊卵母细胞成熟率和细胞到达GVBD、MI和MII期所需的时间。结果显示，在我们的培养条件下，卵母细胞成熟率为75％。8小时，卵母细胞发生GVBD，18小时到达MI期，24小时后，有75％的卵母细胞排出第一极体，到达MII期。然后，我们将Myc．Cdc20cRNA注射到到卵母细胞并进行体外培养，10小时后，我们检测到了MYC．CDC20融合蛋白的表达。但是，成熟时间和成熟率与正常条件下的体外培养并无差异性显著。我们通过westernblot的方法检测了正常培养条件下的绒山羊卵母细胞GV期到MII期CDC20蛋白的表达情况，结果表明从GV期到MIIj

5、期CDC20蛋白一直存在于卵母细胞中。关键词：Cde20的表达，卵母细胞，体外成熟，绒山羊STUDYONTHEEXPRESSIONOFCDC20DURINGCASHMEREGOATOOCYTEMATURATIoNINVITROABSTRACTTheanaphase-promotingcomplexorcyclosome(APC／C)isatlubiquitinligasewhichdrivesmetaphase-to．anaphasetransitionduringcellcycle．CI妇2DactivatesAPC／Cswhenspindlemicrotubule

6、sandchromosomesconnectcorrectlyiflmetaphase．followedchromosomesseparating．ThisiSaveryimportantmechanismwhichmakessurecellcyclefinishesnormallyiflmitosis．Andalso．itplaysasimilarroleinmeiosis．IntIlisstudy,weanalysedtheexpressionofC沈2DiflCashmereGoatoocyteduringitsmaturationinvitro．Myc．C出2

7、0vectorwasconstructedandoverexpressedintheoocytebymicroinjectionmerittranscriptedMyc．C出2DintocRNA．Beside．theexpressionofCdc20wasdetectediflGVGVBD，MIandMIIstageOOCytesbywesternblot．Firstly,weascertainedtheratioofmaturationandthetimetoGVBD．MIand加Iinvitro．Theresultsshowedthatthema