卵母细胞体外成熟评价标准的改良研究

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1、卵母细胞体外成熟评价标准的改良研究作者：杨永杰,孙淑玉,马水英,姜晶晶单位：山东大学1.附属省立医院生殖医学中心，济南250021【摘要】目的探讨改良式人未成熟卵母细胞评分标准的可行性和颗粒细胞指标的合理性及其对卵子发育潜能的影响。方法体外培养卵丘-卵母细胞复合体，按改良式人未成熟卵母细胞评分标准，将未成熟卵母细胞分为优质卵和非优质卵，对成熟卵母细胞进行受精，并对胚胎进行评价；用琼脂糖凝胶电泳检测两类卵的颗粒细胞凋亡。结果优质卵的成熟率、卵裂率和优质胚胎率都优于非优质卵，优质卵成熟数和优质胚胎数与非优质卵比

2、较差异有统计学意义（P<0.01）；非优质卵其卵丘细胞DNA凝胶电泳后形成明显DNA梯带，凋亡程度高于优质卵的卵丘细胞。结论改良式人未成熟卵母细胞评分标准在临床上具有可行性。【关键词】卵母细胞；体外成熟；评价研究；细胞凋亡YANGYongjie1,SUNShuyu2,MAShuiying1,JIANGJingjing1,LIMei1,HUJingmei1,LIYuan1(ShandongUniversity1.CenterforHumanReproductionofShandongProvi

3、ncialHospital,Jinan250021,China；2.SchoolHospital,Jinan250100,China)Tostudythefeasibilityoftheimprovedscoringsystembyevaluatingoocytesculturedinvitro,andtodiscusstherelationshipbetweendevelopmentalpotentialofhumanimmatureoocytesandtheirgranulasacells.Method

4、sCumulusenclosedoocytecomplexes(COCs)werecultured,evaluatedandfertilized.TheIVMoocytesweremorphologicallyclassifiedintotwogroupsbasedontheimprovedscoringstandard.Onegroupwasofhighqualityandtheothergroupwasofpoorquality.Granulosacellapoptosiswasdetectedbya

5、garosegelelectrophoresis.ResultsTheimmatureoocytescoringsystemwasimproved.Thematurationrate，cleavagerateandhighqualityembryosofhighqualityoocyteswerebetterthanthoseofpoorqualityoocytes.DNAofgranulosacellsdistilledfrompoorqualityoocyteswasdiscoveredasDNAlad

6、der，whilethatfromhighqualityoneswasnot.ConclusionTheimprovedscoringstandardisfeasibleinclinicalpractice.Keywords:Oocytes;Invitromaturation;Scoringsystem;Apoptosis1材料与方法1.1未成熟卵的获取、培养与体外受精114例患者均就诊于山东大学附属省立医院生殖医学中心，26～31岁，平均年龄（28.2±3.2）岁，不孕年限平均（3.9&pl

7、usmn;2.7）年。共计取卵154个周期，移植114个周期（74.0％）。于患者月经周期10～12?d肌注人类绒毛膜促性腺激素（hCG）10000?IU，36?h后在异丙酚静脉麻醉下，行未成熟卵取卵术。随后将卵丘复合体放入含有0.075?IU促卵泡激素（FSH）、0.5?IUhCG、10?ng/mL表皮细胞生长因子（EGF）、0.29?mmol丙酮酸钠、10％胎牛血清的TCM199中，在37?℃，5％CO2环境中培养，28～30?h后去除卵丘细胞，评价卵母细胞成熟情况。有第一极体释放的被认为是成熟卵，即

8、行单精子卵细胞浆内注射（ICSI）。16～18?h后，卵细胞浆内如出现双原核，即为正常受精，继续在胚胎培养液中培养24?h后进行胚胎评分，后行宫腔内胚胎移植。1.2卵母细胞评分取出的卵泡液在保温条件下立即送入细胞培养室，在体视显微镜下将卵子挑选出来，并在倒置显微镜下进行卵子质量和成熟情况的评价后进行体外培养，评价培养后的卵母细胞。根据卵母细胞中有无细胞核将未成熟卵母细胞分为MI期和GV期。其中GV期卵母细胞胞浆内