颗粒细胞过表达fshr对猪卵母细胞体外成熟的影响研究

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1、EFFECToFFoLLICLE．STIMULATINGHoRMONERECEPTOR(FSHR)oVER·EXPRESSIONINGRANULoSECELLSoNPIGOoCYTESINⅥTRoMATURATION(IVM)RESEARCHDuJiang-taoAThesisSubmittedtoNanjingAgriculturalUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheMasterDegreeofAgricultureSupervisedByDr．PanJian--zhiandShiFang·—xiongCollegeo

2、fAnimalScienceandTechnologyNanjingAgriculturalUniversityNanjiing210095，P．R．ChinaApr2013原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者(需亲笔)签名：杠。z辫训；年石月歹日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保

3、留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密口，在——年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口。(请在以上方框内打“寸，)学位论文作者(需亲笔)签名：导师(需亲笔)签名：枉够辫列)年∥月5日叫弓年舌月岁日目录目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯IABSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．III英文缩写说明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．V第一章猪卵母细胞IVM及FSHR的研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．卵母细胞在体内发生、发育简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11．1卵泡的发育和成熟⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．11．2卵子在体内的发生和形态结构⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32．卵母细胞体外成熟(1VM)介绍⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．42．1卵母细胞体外成熟培养基础培养液⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52．2基础培养液中添加成分⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．52．3卵巢供体的动物种类年龄、所采集的卵泡大小及采集方式和采集的卵子质量．72．4卵母细胞体外成熟培养的条件⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。73．促卵泡素(FSH)和促黄体生成素(LH)对辱日母细胞体外成熟发育的影响⋯⋯⋯⋯．84．促卵泡素受体(Fs腿)基因及其蛋白质结构简介⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．95．慢病毒载体⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．10第二章猪FSHR克隆及慢病毒载体构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．131．实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯131．1卵

6、巢总RNA提取组织⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯131．2菌株和质粒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．131．3试验试剂及仪器⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．152．实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．162．1卵巢组织总RNA的提取、反转录及FSHR基因的扩增⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．162．2pMDl9一T—FSHR载体的构建、转化、克隆与鉴定⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．18颗粒细胞过表达FSHR对猪卵母细胞体外成熟的影响研究2．3将FSHR基因从pMDl9一T—FSHRI

7、±A1载体质粒上酶切下来⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯212．4慢病毒重组载体CSII-EF．FS圈0IRES2-venus的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯233．实验结果及分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．254．讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38第三章猪卵泡颗粒细胞的培养⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。411．实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯