不同激活方法对猪体外成熟卵母细胞

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1、维普资讯http://www.cqvip.com畜牧兽医学报，2004，35(6)，615—620ActaVeterinariaetZootechnicaSinica不同激活方法对猪体外成熟卵母细胞孤雌发育的影响刘国世，曾申明H，吴中红，邢凤英，田见晖，林平，姜午旗，刘敬浩，朱士恩，张忠诚(1．中国农业大学动物科技学院，北京100094；2．上海第二医科大学发育生物学重点实验室，上海200025)摘要：研究了猪体外成熟卵母细胞的电激活、离子霉素激活和乙醇激活的方法。3种不同激活方法筛选试验表明，猪卵母细胞电激活最佳参数为电场强

2、度130V／min，脉冲时程8Os的1次脉冲激活，即130V／ram一8Os一1次，其囊胚(发育)率为18．92士8．48(P>O．05)；离子霉素激活的最佳条件为15~mol／L、激活时间40rain，其囊胚率为21．27士8．54(P>O．05)；乙醇激活最佳参数以9乙醇激活处理3rain，囊胚率为13．33土7．64。进一步对比试验表明，电激活和离子霉素激活处理的囊胚率和囊胚细胞数无显著差异(P>0．05)，电激活的卵裂率明显高于乙醇激活(P0．05)。关键词：猪；卵母细胞；

3、体外成熟；电激活；离子霉素激活；乙醇激活中图分类号：$828．3；Q492．2文献标识码：A文章编号：0366—6964(2004)06—0615一O6哺乳动物卵母细胞的孤雌激活及发育研究始于1OmL一次性注射器抽取卵巢表面直径2～8mm19世纪3O年代。近十几年来随着核移植技术研究的的卵泡。成熟培养液为NCSU23(或TCM199)+发展，孤雌激活研究也不断深入。受体卵母细胞的有1O卵泡液(PFF)+0．1mg／mL半胱氨酸+效激活，是核移植重构胚发育的关键。受体卵母细胞10ng／mLEGF+10IU／mLPMSG+10IU

4、／mL激活及其发育能力研究，对提高核移植效率及进行hCG。成熟培养在59／5CO。的空气、38．5℃、饱和湿胚胎孤雌发育的研究有重要意义。卵母细胞激活方度的二氧化碳培养箱(Forma，USA)条件下进行。法很多，可分为物理激活和化学激活，物理激活有电1．2卵母细胞的孤雌激活脉冲、机械刺激、改变温度等；化学激活有钙离子载将培养44h的卵丘一卵母细胞复合体(CoCs)移体(A23187和离子霉素)、乙醇、乙基汞硫代水杨酸入0．1透明质酸酶中消化，震荡1min，除去颗粒细钠、酶处理、改变渗透压、麻醉剂、蛋白合成抑制剂胞。电激活用电融

5、合仪(Embryocellfusionsystem，(6-二甲氨基嘌呤6-DMAP、亚胺环己酮CHx、丁酸FujiraIndustryCo．Ltd，Japan)进行。电激活：电激内酯一1BL一1、星形孢菌素)等。应用电激活[1]和化活液为0．3mol／L甘露醇(D—mannitol，Sigma)，学激活(离子霉素一6一DMAP)[4]已经获得了体细胞0．05mmol／LCaC12，0．1mmol／LMgC12。激活后立核移植的活仔猪，但效率较低，仅为19／5～29／5。本研即将卵子移入NCSU23+4mg／mLBSA+究对猪的

6、卵母细胞电激活、离子霉素和乙醇激活条7．5#g／mL细胞松弛素B+10p．g／mL放线菌酮中件进行了的筛选，以获得较佳的孤雌激活方法，为卵清洗并培养，4h后移入NCSU23+4mg／mLBSA母细胞成熟体系、胚胎发育体系的建立，以及体细胞中培养6～7d。离子霉素激活：卵子先移入15L离核移植试验提供有效激活参数。子霉素洗2遍，然后分别处理1O～70min，或15～25L离子霉素处理1O～40min，再移入2mmol／L1材料和方法的DMAP清洗并培养3．5h，最后移入NCSU23+1．1猪卵母细胞的采集与体外成熟培养4mg／m

7、LBSA的发育液中培养6～7d。乙醇激活：从屠宰场收集刚屠宰的猪卵巢，用16号针头的将卵子分别移入不同浓度乙醇(含3mg／mLBSA的TL-HEPES配制)激活液中5min，再分别移入收稿日期：2003—1O-282mmol／LDMAP(NCSU23+4mg／mLBSA配制)基金项目：中国博士后科学基金(2001年)资助培养3．5h，最后分别移入NCSU23+4mg／mL作者简介：刘国世(1972一)，男，山东即墨市人，博士，副教授，主要从BSA培养6～7d。移入9乙醇中洗2遍并处理事动物配子和胚胎生物工程的教学与科研工作*通

8、讯作者：曾申明，E—mailtzengsm@cau．edu．ca5min，后分3种处理方法，前2种处理是将卵子分别维普资讯http://www.cqvip.com616畜牧兽医学报移入2mmol／LDMAP培养3．5h和7．5~g／mL细2．1电激活参数的确定胞松弛素B(CB