猪卵母细胞不同孤雌激活方法的研究.doc

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1、猪卵母细胞不同孤雌激活方法的研究　　摘要：通过对不同电激活参数的摸索，电激活和化学激活联合的研究，以确定适合于猪卵母细胞孤雌激活的最佳方案。结果表明，体外成熟猪卵母细胞在电场时程６０μｓ，１次直流脉冲的条件下，电场强度１．６ｋＶ／ｃｍ时其卵裂率和桑葚胚率较其他各组高。在电场强度为１．６ｋＶ／ｃｍ，１次直流脉冲的条件下，脉冲时程２０μｓ时，卵母细胞卵裂率仅为７５．３８％，桑葚胚率为６４．６２％；４０和８０μｓ时，卵裂率分别是８４．６２％和７７．１７％；１００μｓ时，卵母细胞的卵裂率和桑葚胚率都明显下降。在电场

2、强度为１．６ｋＶ／ｃｍ，电场时程为６０μｓ的条件下，２次电脉冲激活卵母细胞的卵裂率、桑葚胚率和１次电脉冲的卵裂率、桑葚胚率之间无显著性差异，但两者均显著高于３次电脉冲的卵裂率和桑葚胚率。成熟卵母细胞经电刺激后，分别用ＣＢ、ＣＨＸ、6-ＤＭＡＰ、ＣＢ＋ＣＨＸ、ＣＢ＋6-ＤＭＡＰ各自处理４ｈ，ＥＳ＋ＣＢ＋ＣＨＸ和ＥＳ＋ＣＢ＋6-ＤＭＡＰ组卵裂率显著高于其他３组，但其桑葚胚率差异不显著。结果显示，电场强度为１．６ｋＶ／ｃｍ，电场时程６０μｓ，１次脉冲的电刺激对体外成熟的猪卵母细胞孤雌激活效果最好；１次或２次电脉冲

3、就足以激活猪卵母细胞，过高脉冲对细胞反而有伤害作用；电激活和化学激活联合应用可提高猪卵母细胞的卵裂率。　　关键词：卵母细胞；体外培养；孤雌激活；猪　　中图分类号：Ｑ１３２；S828文献标识码：Ａ文章编号：0439－８11421－4431-04　　　　ＤｉｆｆｅｒｅｎｔＰａｒｔｈｅｎｏｇｅｎｅｔｉｃＡｃｔｉｖａｔｉｏｎＭｅｔｈｏｄｆｏｒＰｏｒｃｉｎｅＯｏｃｙｔｅｓ　　　　ＬＩＬｉ１，ＺＨＥＮＧＸｉｎ－ｍｉｎ１，ＨＵＡＺａｉ－ｄｏｎｇ２，ＬＩＵＸｉ－ｍｅｉ１，ＢＩＹａｎ－ｚｈｅｎ１，ＸＩＡＯＨｏｎｇ－ｗｅｉ１　

4、　　　　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｔｈｅｐｒｅｓｅｎｔｓｔｕｄｙ，ｔｈｅparametersｏｆｅｌｅｃｔｒｉｃａｌactivationａｎｄｔｈｅｃｏｍｂｉｎｅｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｓofelectricalactivationandchemicalactivationｏｎｐａｒｔｈｅｎｏｇｅｎｅｔｉｃａｃｔｉｖａｔｉｏｎｆｏｒｉｎｖｉｔｒｏｍａｔｕｒｅｄｐｏｒｃｉｎｅｏｏｃｙｔｅｓｗｅｒｅｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄtofindthebestprogram．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｒａｔｅ

5、sｏｆｃｌｅａｖａｇｅａｎｄｍｏｒｕｌａｏｆｔｈｅｏｏｃｙｔｅｓｕｓｉｎｇｏｎｅＤＣ－ｐｕｌｓｅｏｆ１．６kＶ／ｃｍｆｏｒ６０μｓｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎthatinｔｈｅｏｔｈｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐｓ．Ｔｈｅｃｏｍｐａｒｉｓｏｎｓｔｕｄｙｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｌｅｃｔｒｉｃａｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎｐａｒａｍｅｔｅｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｒａｔｅsｏｆｃｌｅａｖａｇｅｉｎｏｎｅ，ｄｏｕｂｌｅａｎｄｔｈｒｅｅＤＣ－ｐｕｌｓｅｏｆ１．６kＶ／ｃｍｆｏｒ６０μｓ

6、ｗｅｒｅ８８．６８%，８７．５０%ａｎｄ７２．５０％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Andtheratesofmorulawere80.13%，81.25%，65.00%respectively.TheratesofcleavageandmorulaoftheoocytesusingoneDC-pulseof1.6kV/cmfor20μｓwere75.38%，64.62%respectively，whilefor40and80μｓ，theratesofcleavagewere84.62%and77.17%res

7、pectively.For100μｓ，theratesofcleavageandmoruladecreasedremarkably.ＩｔｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｄｏｕｂｌｅＤＣ－ｐｕｌｓｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐｓｗｅｒｅｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｏｆｏｎｅＤＣ－ｐｕｌｓｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐｓ，ｂｕｔｂｏｔｈｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｒｅｅＤＣ－ｐｕｌｓｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐｓ，ｔｈｅｍｏｒｕｌａｒａｔｅｏｆｔｈｅｍｗｅｒｅａｌｓｏ

8、significantｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｅｔｈｒｅｅＤＣ－ｐｕｌｓｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐｓ．ＡｆｔｅｒｅｌｅｃｔｒｉｃａｌactivationｔｈｅｏｏｃｙｔｅｓｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＣＢ，ＣＨＸ，６－ＤＭＡＰ，ＣＢ＋ＣＨＸａｎｄＣＢ＋６－ＤＭＡＰ４ｈｏｕｒｓｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｅｌｅｃｔｒｉｃａｌactivationｗｉｔ